Atividade anti-Candida e inibição de biofilmes por extratos de Licania rigida Benth. e Persea americana Mill
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Data de Publicação: | 2020 |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/41748 |
Resumo: | A elevada incidência de infecções por leveduras do gênero Candida associada ao uso indiscriminado dos agentes antifúngicos, tem causado preocupação devido a seleção de cepas resistentes, principalmente aos antifúngicos da classe dos azólicos. Desta forma, a busca por substâncias naturais, como extratos de plantas, com propriedades antifúngicas tem aumentado consideravelmente. Diante disso, este trabalho objetivou caracterizar a composição química e avaliar o potencial antifúngico do Extrato Etanólico das folhas de Persea americana e Licania rigida, verificando a ação destes na micromorfologia de Candida, bem como o potencial inibitório destes sobre células planctônicas e biofilmes de Candida. Na identificação dos constituintes químicos dos extratos foi utilizado o UPLC-QTOF-MS/MS. A atividade antifúngica in vitro foi determinanda pela Concentraçao Inibitoria Mínima (CIM) de acordo com os documentos M27-A3 e M27-S4 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e verificada a Concentração Fungicida Minima (CFM), utilizando os isolados: Candida krusei URM6352, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840, C. albicans URM5900, C. krusei URM5712, C. albicans ATCC90028, C. tropicalis URM5732, C. tropicalis INCQS40042 e C. albicans INCQS40006. Foi analisado o efeito modulador dos extratos associados ao Fluconazol. As alterações morfológicas e a mensuração dos filamentos das cepas foram observadas através da técnica de microcultivo em câmara úmida. A formação dos biofilmes foi induzida em discos de resina acrílica, e a quantificação foi realizada através da redução de sal tetrazólico (MTT). Para o tratamento dos mesmos, foram utilizados extratos Etanólico das Folhas de P. americana e L. rigida e fluconazol. Neste estudo, foram identificados dez constituintes químicos presentes no extrato de P. americana e seis no extrato de L. rigida. Nos testes de suscetibilidade in vitro, a menor CIM observada para o extrato de Persea foi de 64μg/mL em Candida krusei URM5840, para o fluconazol, as CIM variaram de 64 a 1μg/mL, e frente ao extrato de Licania, a CIM foi 32 μg/mL. A CFM do Extrato de Licania para o isolado C. albicans URM5900 foi de 512 μg/mL, para C. krusei URM5712 igual a 128 μg/mL, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840 e C. krusei URM6352 CFM de 32 μg/mL e para o extrato de Persea com os isolados C. krusei URM6352 e C. krusei URM5840 foi igual a 32 μg/mL; frente a C. krusei URM6352 foi determinado CFM igual a 64 μg/mL. O extrato de Licania apresentou atividade sinérgica com fluconazol frente a cepa Candida krusei URM5712. Os extratos das duas espécies vegetais revelaram-se efetivos na diminuição do processo de filamentação de algumas das cepas analisadas. Quanto a indução do biofilme, todos os isolados foram capazes de formar biofilme in vitro em 48 horas. O extrato de L. rigida demonstrou resultados significativos no tratamento do biofilme de algumas cepas analisadas. Portanto, os extratos testados revelaram atividade antifúngica in vitro contra as células planctônicas das espécies de Candida. O extrato de Licania expressou resultados mais significativos no processo de modulação, diferentemente do observado com o extrato de Persea. Ambos foram efetivos na diminuição do processo de filamentação de cepas utilizadas neste estudo. Portanto, a descoberta do potencial antifúngico destas espécies vegetais permite torná-las ferramentas promissoras como alternativa terapêutica para o tramento de pacientes com infecções causada por espécies de Candida. |
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Diante disso, este trabalho objetivou caracterizar a composição química e avaliar o potencial antifúngico do Extrato Etanólico das folhas de Persea americana e Licania rigida, verificando a ação destes na micromorfologia de Candida, bem como o potencial inibitório destes sobre células planctônicas e biofilmes de Candida. Na identificação dos constituintes químicos dos extratos foi utilizado o UPLC-QTOF-MS/MS. A atividade antifúngica in vitro foi determinanda pela Concentraçao Inibitoria Mínima (CIM) de acordo com os documentos M27-A3 e M27-S4 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e verificada a Concentração Fungicida Minima (CFM), utilizando os isolados: Candida krusei URM6352, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840, C. albicans URM5900, C. krusei URM5712, C. albicans ATCC90028, C. tropicalis URM5732, C. tropicalis INCQS40042 e C. albicans INCQS40006. Foi analisado o efeito modulador dos extratos associados ao Fluconazol. 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Therefore, this work aimed to characterize the chemical composition and evaluate the antifungal potential of the Ethanolic Extract of Persea americana and Licania rigida leaves, verifying their action on Candida micromorphology, as well as their inhibitory potential on Candida planktonic cells and biofilms. In the identification of the chemical constituents of the extracts, UPLC-QTOF-MS / MS was used. The antifungal activity in vitro was determined by the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) according to documents M27-A3 and M27-S4 of the Clinical and Laboratory Standards Institute, and the Minimal Fungicidal Concentration (CFM) was verified, using the isolates: Candida krusei URM6352 , C. krusei URM4263, C. krusei URM5840, C. albicans URM5900, C. krusei URM5712, C. albicans ATCC90028, C. tropicalis URM5732, C. tropicalis INCQS40042 and C. albicans INCQS40006. The modulating effect of extracts associated with Fluconazole was analyzed. The morphological changes and the measurement of the strains' filaments were observed using the microculture technique in a humid chamber. The formation of biofilms was induced in acrylic resin discs, and quantification was performed by reducing the tetrazolic salt (MTT). For their treatment, ethanolic extracts of the leaves of P. americana and L. rigida and fluconazole were used. In this study, ten chemical constituents present in the extract of P. americana and six in the extract of L. rigida were identified. In in vitro susceptibility tests, the lowest MIC observed for Persea extract was 64μg / mL in Candida krusei URM5840, for fluconazole, MICs ranged from 64 to 1μg / mL, and compared to Licania extract, MIC was 32 μg / mL. The CFM of Licania Extract for the isolate C. albicans URM5900 was 512 μg / mL, for C. krusei URM5712 equal to 128 μg / mL, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840 and C. krusei URM6352 CFM 32 μg / mL and for Persea extract with the isolates C. krusei URM6352 and C. krusei URM5840 was equal to 32 μg / mL; against C. krusei URM6352 CFM equal to 64 μg / mL was determined. The Licania extract showed synergistic activity with fluconazole against the strain Candida krusei URM5712. The extracts of the two plant species proved to be effective in reducing the filamentation process of some of the strains analyzed. As for biofilm induction, all isolates were able to form biofilm in vitro within 48 hours. The extract of L. rigida demonstrated significant results in the treatment of the biofilm of some strains analyzed. Therefore, the extracts tested showed antifungal activity in vitro against planktonic cells of Candida species. The Licania extract expressed more significant results in the modulation process, differently from that observed with the Persea extract. Both were effective in decreasing the filamentation process of strains used in this study. Therefore, the discovery of the antifungal potential of these plant species allows them to become promising tools as a therapeutic alternative for treating patients with infections caused by Candida species.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biologia de FungosUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessMicologia médicaFungosCandidaAtividade anti-Candida e inibição de biofilmes por extratos de Licania rigida Benth. e Persea americana Millinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisdoutoradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALTESE Maria Audilene de Freitas.pdfTESE Maria Audilene de Freitas.pdfapplication/pdf1270421https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/41748/1/TESE%20Maria%20Audilene%20de%20Freitas.pdfeb964d168f059df4708501f92c211c94MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/41748/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81908https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/41748/3/license.txtc59d330e2c454f71974f5866a0e8a96aMD53TEXTTESE Maria Audilene de Freitas.pdf.txtTESE Maria Audilene de Freitas.pdf.txtExtracted texttext/plain138732https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/41748/4/TESE%20Maria%20Audilene%20de%20Freitas.pdf.txtfbd1c18c6096d13fc272c5fb9e851a4bMD54THUMBNAILTESE Maria Audilene de Freitas.pdf.jpgTESE Maria Audilene de Freitas.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1286https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/41748/5/TESE%20Maria%20Audilene%20de%20Freitas.pdf.jpg05f1680face90cc09de52b3c8642f881MD55123456789/417482021-11-23 02:10:34.8oai:repositorio.ufpe.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212021-11-23T05:10:34Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false |
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