Avaliação de atividade ovocida de lectinas ligadoras de quitina contra Aedes aegypti
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/31075 |
Resumo: | As lectinas, proteínas de ligação a carboidratos, isoladas a partir de sementes de Moringa oleifera (WSMoL), bem como da entrecasca (MuBL), cerne (MuHL) e folha (MuLL) de Myracrodruon urundeuva são agentes larvicidas contra Aedes aegypti. WSMoL também foi relatada como agente ovicida contra este mosquito e a sua concentração necessária para reduzir a taxa de eclosão em 50% (EC50) é de 0,1 mg/mL. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade ovicida de MuBL, MuHL e MuLL, bem como avaliar os locais de ligação de WSMoL e MuBL nos ovos de A. aegypti. As lectinas foram isoladas seguindo protocolos previamente estabelecidos que incluíram extração das proteínas da farinha (10 g) do tecido vegetal com 100 mL de água destilada (WSMoL) ou NaCl 0,15 M (MuHL, MuBL, MuLL), precipitação de proteínas com sulfato de amônio (0-60%, WSMoL; 20-40%, MuBL; 40-60%, MuHL; 60-80%, MuLL) e cromatografias em colunas de quitina equilibradas (0,6 mL/min) com NaCl 0,15 M e eluidas com ácido Acético 1,0 M. As lectinas isoladas foram dialisadas (6h em água destilada) para a eliminação do eluente. Os ovos em papel de filtro foram selecionados considerando a sua integridade utilizando um estereomicroscópio. Cada ensaio ovicida correspondeu a 20 mL de solução de lectina onde foram imersos 50 ovos. O número de larvas eclodidas foi determinado após 72 h de incubação a 25-27 °C e a EC50 foi determinada pela análise de probit. Os conjugados WSMoL-FITC e MuBL-FITC (na EC50) foram utilizados para avaliar os locais de ligação das lectinas utilizando um microscópio de fluorescência. Os controles contendo apenas os ovos ou ovos incubados apenas com o FITC também foram realizados. MuBL, MuHL e MuLL foram agentes ovicidas e os valores de EC50 foram 0,26, 0,80 e 0,88 mg/mL, respectivamente. Com base nos melhores valores da EC50, WSMoL e MuBL foram selecionados para análise de microscopia de fluorescência. Em comparação com os controles, as imagens revelaram a presença de WSMoL-FITC na cabeça, proventriculo e intestino de embriões. A marcação MuBL-FITC foi observada na cabeça e no trato digestivo. Em conclusão, as lectinas de M. urundeuva também são agentes ovicidas contra A. aegypti e a atividade ovicida de WSMoL e MuBL está ligada à penetração dessas proteínas no ovo e interação com o trato digestivo do embrião em desenvolvimento. |
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ALVES, Robson Raion de Vasconceloshttp://lattes.cnpq.br/2291878722264444http://lattes.cnpq.br/2885145995086459PAIVA, Patrícia Maria GuedesNAPOLEÃO, Thiago Henrique2019-06-12T23:17:15Z2019-06-12T23:17:15Z2018-02-26https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/31075As lectinas, proteínas de ligação a carboidratos, isoladas a partir de sementes de Moringa oleifera (WSMoL), bem como da entrecasca (MuBL), cerne (MuHL) e folha (MuLL) de Myracrodruon urundeuva são agentes larvicidas contra Aedes aegypti. WSMoL também foi relatada como agente ovicida contra este mosquito e a sua concentração necessária para reduzir a taxa de eclosão em 50% (EC50) é de 0,1 mg/mL. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade ovicida de MuBL, MuHL e MuLL, bem como avaliar os locais de ligação de WSMoL e MuBL nos ovos de A. aegypti. 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Os conjugados WSMoL-FITC e MuBL-FITC (na EC50) foram utilizados para avaliar os locais de ligação das lectinas utilizando um microscópio de fluorescência. Os controles contendo apenas os ovos ou ovos incubados apenas com o FITC também foram realizados. MuBL, MuHL e MuLL foram agentes ovicidas e os valores de EC50 foram 0,26, 0,80 e 0,88 mg/mL, respectivamente. Com base nos melhores valores da EC50, WSMoL e MuBL foram selecionados para análise de microscopia de fluorescência. Em comparação com os controles, as imagens revelaram a presença de WSMoL-FITC na cabeça, proventriculo e intestino de embriões. A marcação MuBL-FITC foi observada na cabeça e no trato digestivo. Em conclusão, as lectinas de M. urundeuva também são agentes ovicidas contra A. aegypti e a atividade ovicida de WSMoL e MuBL está ligada à penetração dessas proteínas no ovo e interação com o trato digestivo do embrião em desenvolvimento.FACEPELectins, carbohydrate-binding proteins, isolated from seeds of Moringa oleifera (WSMoL) as well as bark (MuBL), heartwood (MuHL) and leaf (MuLL) of Myracrodruon urundeuva are larvicidal agents against Aedes aegypti. WSMoL was also reported as an ovicidal agent against this mosquito and the concentration of this lectin required to reduce the hatching rate in 50% (EC50) is 0.1 mg/mL. This work aimed to evaluate the ovicidal activity of MuBL, MuHL and MuLL as well as to evaluate the binding sites of WSMoL and MuBL in the eggs. The lectins were isolated following previously established protocols which included extraction of proteins from tissue (10 g) plants with 100 mL of distilled water (WSMoL) or 0.15 M NaCl (MuHL, MuBL and MuLL), ammonium sulfate protein precipitation (0-60%, WSMoL; 20-40%, MuBL; 40-60%, MuHL; 60-80%, MuLL) and chromatography on chitin columns (0.6 mL/min) equilibrated with 0.15 M NaCl and eluted with 1.0 M acetic acid. The isolated lectins were dialyzed (6h in distilled water) for the removal of the eluent. Eggs on filter papers were selected by considering their integrity using a stereomicroscope. Each ovicidal assay corresponded to 20 mL of lectin solution in which were immersed 50 eggs. The number of hatched larvae was determined after 72 h of incubation at 25-27 ºC and the EC50 was determined by probit analysis. WSMoL-FITC and MuBL-FITC conjugates (at EC50) were used to evaluated binding sites of the lectins using a fluorescence microscope. Controls contained only the eggs and eggs incubated only with FITC were performed. MuBL, MuHL and MuLL were ovicidal agents and the EC50 values were 0.26, 0.80 and 0.88 mg/mL, respectively. Based on the best EC50 values, WSMoL and MuBL were selected for fluorescence microscopy analysis. Compared with controls, the images revealed the presence of WSMoL-FITC in the head, proventriculus, and gut of embryos. MuBL-FITC labeling was observed in the head and digestive tract. In conclusion, M. urundeuva lectins are also ovicidal agents against A. aegypti and the ovicidal activity of WSMoL and MuBL is linked to penetration of these proteins in the egg and interaction of them with the digestive tract of the embryo in development.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias BiologicasUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessLectinasMoringa oleiferaAedes aegyptiAvaliação de atividade ovocida de lectinas ligadoras de quitina contra Aedes aegyptiinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Robson Raion de Vasconcelos Alves.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Robson Raion de Vasconcelos Alves.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1381https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/31075/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Robson%20Raion%20de%20Vasconcelos%20Alves.pdf.jpgb7c0d68f30ce8d992b0bc384289b1af8MD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Robson Raion de Vasconcelos Alves.pdfDISSERTAÇÃO Robson Raion de Vasconcelos Alves.pdfapplication/pdf889612https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/31075/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Robson%20Raion%20de%20Vasconcelos%20Alves.pdf675f757d89b356624b1718054126ecebMD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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