Avaliação in situ de FOXP3+ E IL17 em fígado e intestino de camundongos infectados experimentalmente com Schistosoma mansoni e tratados com Bacillus clausii (O/C, N/R, T e SIN)
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/46377 |
Resumo: | A esquistossomose é uma doença parasitária negligenciada caracterizada por uma resposta granulomatosa inflamatória contra o ovo depositado no tecido do hospedeiro, especialmente nos tecidos hepáticos e intestinal. Atualmente o tratamento da esquistossomose é baseado unicamente no uso do praziquantel (PZQ). Os probióticos têm sido usados no tratamento de doenças gastrointestinais entre outras e seu mecanismo atribuído a possível atividade imunomodulatória. O Bacillus clausii tem sido usado amplamente como probiótico mais existem poucos estudos que caracterizam seus mecanismos imunomodulatórios. Desta forma este estudo vem avaliar o potencial imunomodulatório do Bacillus clausii (O/C, N/R, T e SIN) e seu potencial como adjuvante no tratamento da esquistossomose mansônica. Camundongos foram distribuídos em cinco grupos experimentais, separados de acordo com exposição cercariana e esquema terapêutico adotado: G1(não infectado) e G2 (não infectado e tratado com B.clausii), G3 (infectado), G4 (infectado e tratado profilaticamente) e G5 (infectado e tratado após oviposição). B. clausii foi administrado diariamente por gavagem em dose única de (1000000000 UFC/mL) em 300 μL. Após 100 dias, os baços foram excisados e as células esplênicas foram cultivadas com estímulo de Enterogermina (EG), ConA ou sem estímulo. Ossobrenadantes das culturas foram utilizados para dosagem de citocinas IL12p70, IL10 e IFN-gama por citometria de fluxo (CBA). Fragmentos de fígado e intestino foram removidos para realizar a avaliação in situ de FOXP3 e IL17 por reação de imunohistoquimica utilizando o sistema imunoperoxidase. Nossos resultados demonstraram que animais tratados com B. clausii apresentaram produção significativamente mais elevada de IL12 p70 (p<0,05), assim como as culturas de células de animais infectados estimulados com Enterogermina® (EG). No estímulo com ConA, o grupo que recebeu o B. clausii curativamente (G5) apresentou níveis significantemente maior de IFN-gama (p<0,05) que os animais infectados sem tratamento (G3). O tratamento com B. clausii aumentou os níveis de citocina IL-10 nos animais do grupo infectado tratado após início da oviposição (G5), quando comparado a todos os demais grupos. Os animais infectados e não tratados (G3) apresentaram níveis mais elevados de FOXP3, no tecido hepático e intestinal em comparação aos grupos que receberam o tratamento com B. clausii. Por outro lado, o tratamento com B. clausii, na ausência de infecção, elevou significativamente a marcação de IL17A no tecido intestinal. Os camundongos infectados e não tratados com o B. clausii apresentaram razão maior de FOXP3+/IL17A que todos os grupos tratados. A marcação de IL17A+ no intestino mostrou uma correlação negativa com a IL10 nos animais do grupo G4 . Nos animais G3 a IL17A no intestino apresentou correlação negativa com IFN-gama e positiva com IL10. Por outro lado, na marcação de Foxp3 no intestino observamos correlaçao positiva com IL10 no grupo de animais G3. A correlação com IL10 foi negativa nos animais que G4. Em conclusão, nossos resultados demonstram que B. clausii tem grande potencial imunomodulatório, induziu a produção de citocinas de perfil Th1, embora também possa induzir citocinas de perfil regulatório. |
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Os probióticos têm sido usados no tratamento de doenças gastrointestinais entre outras e seu mecanismo atribuído a possível atividade imunomodulatória. O Bacillus clausii tem sido usado amplamente como probiótico mais existem poucos estudos que caracterizam seus mecanismos imunomodulatórios. Desta forma este estudo vem avaliar o potencial imunomodulatório do Bacillus clausii (O/C, N/R, T e SIN) e seu potencial como adjuvante no tratamento da esquistossomose mansônica. Camundongos foram distribuídos em cinco grupos experimentais, separados de acordo com exposição cercariana e esquema terapêutico adotado: G1(não infectado) e G2 (não infectado e tratado com B.clausii), G3 (infectado), G4 (infectado e tratado profilaticamente) e G5 (infectado e tratado após oviposição). B. clausii foi administrado diariamente por gavagem em dose única de (1000000000 UFC/mL) em 300 μL. 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A correlação com IL10 foi negativa nos animais que G4. Em conclusão, nossos resultados demonstram que B. clausii tem grande potencial imunomodulatório, induziu a produção de citocinas de perfil Th1, embora também possa induzir citocinas de perfil regulatório.CAPESSchistosomiasis is a neglected parasitic disease characterized by a granulomatous inflammatory response against the egg deposited in the host tissue, especially in the hepatic and intestinal tissues. Currently, the treatment of schistosomiasis is based solely on the use of praziquantel (PZQ). Probiotics have been used in the treatment of gastrointestinal diseases, among others, and their mechanism is attributed to possible immunomodulatory activity. Bacillus clausii has been widely used as a probiotic, but there are few studies that characterize its immunomodulatory mechanisms. Thus, this study evaluates the immunomodulatory potential of Bacillus clausii (O/C, N/R, T and SIN) and its potential as an adjuvant in the treatment of schistosomiasis mansoni. Mice were divided into five experimental groups, separated according to cercarial exposure and therapeutic regimen adopted: G1 (non-infected) and G2 (non-infected and treated with B. clausii), G3 (infected), G4 (infected and prophylactically treated) and G5 (infected and treated after oviposition). B. clausii was administered daily by gavage in a single dose of (1000000000 CFU/mL) in 300 μL. After 100 days, spleens were excised and splenic cells were cultured with Enterogermin (EG), ConA or without stimulation. Culture supernatants were used for measurement of cytokines IL12p70, IL10 and IFN-gamma by flow cytometry (CBA). Liver and intestine fragments were removed to perform the in situ evaluation of FOXP3 and IL17 by immunohistochemistry reaction using the immunoperoxidase system. Our results demonstrated that animals treated with B. clausii had significantly higher production of IL12 p70 (p<0.05), as did cell cultures from infected animals stimulated with Enterogermina® (EG). In the stimulus with ConA, the group that received the B. clausii curatively (G5) had significantly higher levels of IFN-gamma (p<0.05) than the infected animals without treatment (G3). Treatment with B. clausii increased IL-10 cytokine levels in animals in the treated infected group after the onset of oviposition (G5), when compared to all other groups. Infected and untreated animals (G3) had higher levels of FOXP3 in liver and intestinal tissue compared to groups that received treatment with B. clausii. On the other hand, treatment with B. clausii, in the absence of infection, significantly increased IL17A labeling in intestinal tissue. Mice infected and untreated with B. clausii had a higher ratio of FOXP3+/IL17A than all treated groups. The labeling of IL17A+ in the intestine showed a negative correlation with IL10 in the animals of the G4 group. In G3 animals, IL17A in the intestine showed a negative correlation with IFN-gamma and a positive correlation with IL10. On the other hand, when marking Foxp3 in the intestine, we observed a positive correlation with IL10 in the group of G3 animals. The correlation with IL10 was negative in animals that G4. In conclusion, our results demonstrate that B. clausii has great immunomodulatory potential, induced the production of Th1 cytokines, although it can also induce cytokines with a regulatory profile.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Medicina TropicalUFPEBrasilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/embargoedAccessProbióticosBacillus clausiiSchistosoma mansoniImunomodulaçãoAvaliação in situ de FOXP3+ E IL17 em fígado e intestino de camundongos infectados experimentalmente com Schistosoma mansoni e tratados com Bacillus clausii (O/C, N/R, T e SIN)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdfDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdfapplication/pdf2327410https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/46377/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Juliana%20Florentino%20Man%c3%a9.pdf588433e8237c01b2785f3cd2b638a593MD51TEXTDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdf.txtDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdf.txtExtracted texttext/plain162803https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/46377/4/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Juliana%20Florentino%20Man%c3%a9.pdf.txt4a6a142902da527f2cefcea6a152135cMD54THUMBNAILDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Juliana Florentino Mané.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1253https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/46377/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Juliana%20Florentino%20Man%c3%a9.pdf.jpg3b3ccedc6e27167314d5ce3a078b824cMD55CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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