Avaliação de ROP2 recombinante de Neospora caninum como imunobiológico
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Data de Publicação: | 2017 |
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Resumo: | Neospora caninum é um parasito intracelular, apicomplexa, uma das principais causas de aborto em bovinos levando a perdas econômicas significativas. A busca pelo controle da neosporose tem motivado amplos estudos, utilizando como alvos, proteínas recombinantes derivadas de organelas do protozoário, em modelos animais. A inoculação de vacinas de subunidade tem demonstrado que respostas imunes Th1 e Th1/Th2 são protetoras ao desafio, entretanto, ineficientes no bloqueio a infecção fetal. Os objetivos deste estudo foram a expressão de rNcROP2 e sua fusão com LTB, resultando rNcROP2 e rLTB/NcROP2 em Escherichia coli, avaliação a antigenicidade das proteínas produzidas frente a soros de bovinos naturalmente infectados, e identificação da indução de citocinas produzida quando utilizada como vacina de subunidade em camundongos BALB/c. As proteínas rNcROP2 e rLTB/NcROP2 foram expressas de forma insolúvel, solubilizadas apenas em ureia a 8 M, apresentando um rendimento de aproximadamente 125 mg/L e 25 mg/L, respectivamente. A conformação adotada pelas duas construções permitiu o reconhecimento de epítoposantigênico. A proteína rNcROP2 usada como diagnóstico em bovinos apresentou sensibilidade e especificidade de 100% com ponto de corte >0,044. Como imunógenos vacinais, as duas proteínas em doses de 25 µg foram imunogênicas, umavez que estimularam a produção de anticorpos IgG após a segunda dose mantendo-se até 60 dias após inoculação, principalmente do isotipo IgG1. Na expressão de citocinas utilizando rLTB/NcROP2 observou-se uma reduzida estimulação de citocinas IL-10 e IFN-γ, a inoculação não trouxe aumento significativo de IL-10 e IFN-γ. No entanto a indução de IL-12 e IL-17 teve aumento significativo após a inoculação. As respostas à inoculação de rNcROP2 e rLTB/NcROP2 em nosso estudo sugerem que os alvos são capazes de produzir uma resposta Th1/Th17. Os resultados reportam umaindução significativa de IL-17 por vacinas de subunidade com ROP2, esse efeito sugere ser promissor em estudos de proteção contra N. caninum. |
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2023-11-30T19:51:58Z2023-11-302023-11-30T19:51:58Z2017-04-04SANTOS JUNIOR, Alceu Gonçalves. Avaliação de ROP2 recombinante de Neospora caninum como imunobiológico. 2017. 57f. Tese (Doutorado em Veterinária) - Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2017.http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/handle/prefix/10807Neospora caninum é um parasito intracelular, apicomplexa, uma das principais causas de aborto em bovinos levando a perdas econômicas significativas. A busca pelo controle da neosporose tem motivado amplos estudos, utilizando como alvos, proteínas recombinantes derivadas de organelas do protozoário, em modelos animais. A inoculação de vacinas de subunidade tem demonstrado que respostas imunes Th1 e Th1/Th2 são protetoras ao desafio, entretanto, ineficientes no bloqueio a infecção fetal. Os objetivos deste estudo foram a expressão de rNcROP2 e sua fusão com LTB, resultando rNcROP2 e rLTB/NcROP2 em Escherichia coli, avaliação a antigenicidade das proteínas produzidas frente a soros de bovinos naturalmente infectados, e identificação da indução de citocinas produzida quando utilizada como vacina de subunidade em camundongos BALB/c. As proteínas rNcROP2 e rLTB/NcROP2 foram expressas de forma insolúvel, solubilizadas apenas em ureia a 8 M, apresentando um rendimento de aproximadamente 125 mg/L e 25 mg/L, respectivamente. A conformação adotada pelas duas construções permitiu o reconhecimento de epítoposantigênico. A proteína rNcROP2 usada como diagnóstico em bovinos apresentou sensibilidade e especificidade de 100% com ponto de corte >0,044. Como imunógenos vacinais, as duas proteínas em doses de 25 µg foram imunogênicas, umavez que estimularam a produção de anticorpos IgG após a segunda dose mantendo-se até 60 dias após inoculação, principalmente do isotipo IgG1. 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Inoculation of subunit vaccines has demonstrated that Th1 and Th1/Th2 immune responses are protective to the challenge, however ineffective in blocking fetal infection. The objectives of this study were the expression of rNcROP2 and its fusion with LTB, resulting in rNcROP2 and rLTB/NcROP2 in Escherichia coli, evaluation of the antigenicity of proteins produced against naturally infected bovine sera, and identification of cytokine induction produced when used as a vaccine of subunit in BALB/c mice. The rNcROP2 and rLTB/NcROP2 proteins were expressed in an insoluble form, solubilized in only 8 M urea, yielding approximately 125 mg/L and 25 mg/L, respectively. The conformation adopted by the two constructs permitted the recognition of antigenic epitopes. The rNcROP2 protein used as a diagnostic in cattle showed sensitivity and specificity of 100 % with cutoff >0.044. As immunogenic vaccines, the two proteins at doses of 25 μg were immunogenic, since they stimulated the production of IgG antibodies after the second dose being maintained up to 60 days after inoculation, mainly of the IgG1 isotype. In the expression of cytokines using rLTB/NcROP2 a reduzed stimulation of cytokines IL-10 and IFN-γ it was observed, the inoculation did not bring significant increase of IL-10 and IFN- γ. However, IL-12 e IL-17 induction had a significant increase after inoculation. Responses to rNcROP2 and rLTB/NcROP2 inoculation in our study suggest that the targets are capable of producing a Th1/Th17 response. The results report a significant increase induction of IL-17 by subunit vaccines with ROP2, this effect suggests to be promisingin studies of protection against N. caninum.Sem bolsaporUniversidade Federal de PelotasPrograma de Pós-Graduação em VeterináriaUFPelBrasilCC BY-NC-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessCIENCIAS AGRARIASMEDICINA VETERINARIAPATOLOGIA ANIMALProtozoáriosBovinosProteínasExpressãoImunógenoProtozoanCattleProteinsExpressionImmunogenAvaliação de ROP2 recombinante de Neospora caninum como imunobiológicoEvaluation of recombinant ROP2 of N. caninum as vaccine antigeninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttp://lattes.cnpq.br/2041933035920634http://lattes.cnpq.br/0198257253890399Nizoli, Leandro Quintanahttp://lattes.cnpq.br/3556266527587195Leite , Fábio Pereira LeivasSantos Junior, Alceu Gonçalves dosreponame:Repositório Institucional da UFPel - Guaiacainstname:Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)instacron:UFPELORIGINALTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdfTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdfapplication/pdf1244349http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/10807/1/Tese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdfc31a7555dbc2df7a59010818b0ace008MD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81960http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/10807/2/license.txta963c7f783e32dba7010280c7b5ea154MD52open accessTEXTTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.txtTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.txtExtracted texttext/plain133913http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/10807/3/Tese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.txt0069a2e3e1710635d6b003520da9aaceMD53open accessTHUMBNAILTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.jpgTese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1218http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/10807/4/Tese_Alceu_Goncalves_dos_Santos_Junior.pdf.jpge065b27d9f6ce08015e36f535923bc5cMD54open accessprefix/108072023-12-01 03:00:30.956open accessoai:guaiaca.ufpel.edu.br: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Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufpel.edu.br/oai/requestrippel@ufpel.edu.br || repositorio@ufpel.edu.br || aline.batista@ufpel.edu.bropendoar:2023-12-01T06:00:30Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca - Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)false |
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