Desenvolvimento de vacina recombinante contra a leptospirose: produção e avaliação do potencial imunoprotetor de quatro lipoproteínas

• Autor(a) principal: Deliberalli, Ivânia
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
• Texto Completo: http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/prefix/3716
• topic: CNPQ::OUTROS; Biotecnologia; Leptospirose; Vacinas recombinantes; Lipoproteínas; Resposta humoral; Leptospirosis; Recombinant vaccine; Lipoproteins; Humoral reponse

A leptospirose é uma doença causada por espiroquetas do gênero Leptospira. É uma zoonose de ampla distribuição geográfica, sendo um problema de saúde pública e veterinária, principalmente em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento de clima tropical e subtropical. Em medicina veterinária, a leptospirose é uma doença importante tanto para a clínica quanto para a produção, devido ao risco à saúde pública, perdas reprodutivas e óbitos. A vacinação animal é realizada como medida de prevenção da enfermidade, entretanto, a proteção conferida pelas vacinas comerciais é limitada e não evita a condição de portador. Os antígenos protéicos da membrana externa parecem ser a melhor alternativa para substituir as vacinas atualmente disponíveis, porém, após diversos estudos, nenhum apresentou resultados satisfatórios. O objetivo deste trabalho foi avaliar antígenos recombinantes e preparações vacinais, capazes de conferir proteção de amplo espectro, em hamsters (Mesocricetus auratus). Neste estudo, quatro novas proteínas recombinantes de Leptospira spp foram obtidas e testadas no modelo de leptospirose aguda em hamster para avaliar vacinas experimentais. A análise in silico do genoma de L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagie sorovar Copenhageni cepa FIOCRUZ L1-130 foi realizada para identificar genes alvo potenciais para o desenvolvimento de vacinas de subunidade. Quatro genes foram selecionados para expressão de proteínas recombinantes em sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli: lic10260, lic10365, lic11207 e lic11360, que codificam para prováveis lipoproteína de membrana externa. Os genes foram amplificados a partir do DNA genômico de L. borgpeterseni sorogrupo Ballum cepa 4E. Os procedimentos de clonagem resultaram nos vetores recombinantes pAE/lic10260, pAE/lic10365, pAE/lic11207 e pAE/lic11360. As proteínas recombinantes foram eficientemente expressas nesse sistema de expressão e posteriormente, utilizadas na imunização de hamsters que foram subsequentemente desafiados com dose letal de L. borgpeterseni sorovar Ballum 4E. A resposta imune humoral induzida pelas proteínas foi avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA) e verificou-se que, pelo menos uma das formulações vacinais para cada proteína produziu resposta humoral significativa estatisticamente (p < 0,05). As proteínas rLIC10260, rLIC10365, rLIC11207 e rLIC11360 mostraram-se imunogênicas, tornando promissora sua utilização como vacinas contra leptospirose.