Expressao e purificaçao da proteína GInD de Herbaspirillum seropedicae

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Couto, Gustavo Henrique
Data de Publicação: 2005
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/1964
Resumo: Orientador : Fabio de Oliveira Pedrosa
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spelling Couto, Gustavo HenriqueBenelli, Elaine Machado, 1970-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Pedrosa, Fabio O., 1947-2019-05-24T19:59:43Z2019-05-24T19:59:43Z2005https://hdl.handle.net/1884/1964Orientador : Fabio de Oliveira PedrosaCo-orientadora : Elaine Machado BenelliDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: O Herbaspirillum seropedicae é um diazotrofo endofítico encontrado dentro de raízes, caules e folhas de diversas gramíneas de interesse agrícola. Essa bactéria é capaz de fixar nitrogênio atmosférico sob condições microaeróbicas e na ausência de amônio. Em H. seropedicae o sistema Ntr participa da regulação da expressão da proteína NifA, ativadora transcricional dos genes responsáveis pela fixação de nitrogênio atmosférico. A proteína GlnD possui um papel chave na regulação do sistema Ntr atuando como um sensor dos níveis de nitrogênio intracelular e controlando o estado de uridililação da proteína GlnB, uma das proteínas envolvidas na cascata de regulação da fixação de nitrogênio. O gene glnD foi amplificado a partir do DNA genômico do H. seropedicae utilizando oligonucleotídeos sintetizados. A seqüência do gene glnD de H. seropedicae foi obtida do Banco de Dados do Projeto de Sequenciamento Genômico do H. seropedicae - GENOPAR (Programa Genoma do Paraná). O fragmento amplificado foi clonado no vetor pGEM-T e subclonado nos vetores de expressão pET28b(+) e pET29a(+) originando os plasmídeos pGH1 e pGH2, capazes de superexpressar a proteína GlnD ligada a uma cauda N-terminal de histidinas (GlnD-His) e na sua forma nativa (GlnD), respectivamente. As condições de expressão das proteínas GlnD e GlnD-His na estirpe duplo-mutante glnB' e glnD' de E. coli RB9065(ÀDE3) foram otimizadas. Para aumentar a quantidade de proteína solúvel foi investigado o efeito de diferentes fatores na composição do tampão de lise das células. A proteína GlnD-His foi purificada por cromatografia de afinidade numa coluna de afinidade (HiTrap- Chelating-Ni+2) em uma única etapa. A proteína GlnD nativa foi parcialmente purificada por cromatografia de troca aniônica (DEAE-Sepharose) em um sistema de FPLC.99f. : il. algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalTesesBioquímicaProteínasNitrogênio - FixaçãoExpressao e purificaçao da proteína GInD de Herbaspirillum seropedicaeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - GUSTAVO HENRIQUE COUTO.pdfapplication/pdf13619832https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/1964/1/R%20-%20D%20-%20GUSTAVO%20HENRIQUE%20COUTO.pdf2cea1bb606dae951d070a17e7b0759a1MD51open access1884/19642019-05-24 16:59:43.211open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/1964Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082019-05-24T19:59:43Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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