Expressão e caracterização dos dominios central+C- terminal da proteina NIFA de Herbaspirillum seropedicae

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Monteiro, Rose Adele
Data de Publicação: 1998
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/87394
Resumo: Orientadores: Leda Satie Chubastu, Fabio de Oliveira Pedrosa
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spelling Pedrosa, Fabio O., 1947-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Chubatsu, Leda Satie, 1966-Monteiro, Rose Adele2024-04-26T20:25:43Z2024-04-26T20:25:43Z1998https://hdl.handle.net/1884/87394Orientadores: Leda Satie Chubastu, Fabio de Oliveira PedrosaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do ParanaResumo: A proteína NifA é responsável pela ativação da transcrição dos operons nif em diazotrofos. Neste trabalho são apresentados resultados referentes a expressão e caracterização in vivo e in vitro dos domínios Central e C-terminal da proteína NifA H. seropedicae. Para a produção da proteína, dois sistemas foram utilizados: a expressão como proteína de fusão a glutationa S-transferase ou a um polipeptídeo contendo histidinas (His-Tag). A expressão da proteína de fusão GST-Central+C-terminal foi elevada, porém apresentou-se de forma insolúvel. Após processo de desnaturação e renaturação, a proteína foi purificada por cromatografia de afinidade e testada quanto a sua capacidade de ligação ao DNA, apresentando um resultado negativo. A proteína também foi utilizada para a produção de anticorpos policlonais. Testes de "immunoblot" indicaram que os anticorpos reconhecem a proteína NifA nativa e seus domínios Central e C-terminal, não reconhecendo a proteína homóloga de K. pneumoniae ou a glutationa S-transferase. A proteína de fusão His-Tag Central+C-terminal também apresentou um elevado grau de expressão e mostrou-se parcialmente solúvel. Após cromatografia por afinidade, a proteína foi capaz de ligar-se a região promotora do gene nifB de H. seropedicae de forma específica. Ensaios in vivo em E. coli, utilizando fusões nifH::lacZ, mostraram que a proteína é capaz de ativar a transcrição na ausência de O2 e independente da concentração de íons NH4+ . NifA íntegra, expressa e analisada nas mesmas condições, não mostrou capacidade de ativar a transcrição indicando a ausência de uma proteína reguladora para a sua atividade em E. coli.126 f. : il. color. ; 30 cm.application/pdfDisponível em formato digitalBioquímicaNitrogênio - FixaçãoMicroorganismos fixadores de nitrogenioHerbaspirillum seropedicaeBacterias diazotroficasTesesExpressão e caracterização dos dominios central+C- terminal da proteina NIFA de Herbaspirillum seropedicaeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALD - D - ROSE ADELE MONTEIRO.pdfapplication/pdf14909561https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/87394/1/D%20-%20D%20-%20ROSE%20ADELE%20MONTEIRO.pdf9385798b68bb888d71fafbb53c59ce9bMD51open access1884/873942024-04-26 17:25:43.631open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/87394Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-04-26T20:25:43Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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