Caracterização molecular e epidemiológica dos Enterovírus e Parechovírus humanos causadores das meningites virais no Município de Curitiba e Região Metropolitana, no período de julho de 2005 a dezembro de 2006.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vidal, Luine Rosele Renaud
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/35353
Resumo: Orientadora : Profa. Dra. Iara José Taborda de Messias-Reason
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spelling Vidal, Luine Rosele RenaudAlmeida, Sérgio Monteiro de, 1964-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasMessias, Iara José Taborda de, 1958-2018-07-02T18:29:38Z2018-07-02T18:29:38Z2011http://hdl.handle.net/1884/35353Orientadora : Profa. Dra. Iara José Taborda de Messias-ReasonCoorientador: Prof. Dr. Sérgio Monteiro de AlmeidaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 07/12/2011Bibliografia: fls. 115-129Área de concentração: Análises ClínicasResumo: As meningites podem ser causadas por vários agentes etiológicos, sendo as enteroviroses importantes patógenos neurotrópicos em seres humanos. Aproximadamente 90% dos casos de meningites virais são devidos ao grupo dos enterovírus (EV) como coxsackievirus e echovirus que incluem vários sorotipos. Aproximadamente 50% dos internamentos por meningites, nos hospitais de Curitiba, são atribuídos à etiologia viral e 46% desses diagnósticos foram baseados apenas na contagem diferencial de células do líquido cefalorraquidiano (LCR). O presente estudo tem como objetivo definir o perfil epidemiológico e caracterizar molecularmente os EV e parechovírus humano (HPeV), utilizando-se amostras de LCR coletadas de pacientes com sinais e sintomas de meningite viral. Coletou-se 440 amostras de LCR de 3 hospitais da cidade de Curitiba no período de julho de 2005 a junho de 2006. As metodologias utilizadas para o detecção do segmento do genoma 5’ não codificador (5’ NC) do EV ou HPeV foram a transcrição reversa seguida da PCR (RT-PCR) e para o sequenciamento genético, pesquisou-se o gene VP1 para posterior análise filogenética. Além disso, as características bioquímicas e de celularidade do LCR e a coleta dos dados epidemiológicos anotados na ficha epidemiológica, foram analisados. Os EV ou HPeV foram detectados em 49/440 (11%) das amostras de LCR obtidas de pacientes com suspeita clínica de meningite viral por meio da metodologia de RT-PCR. Algumas amostras foram selecionadas em analisadas pela metodologia de PCR em tempo real. A análise das características operacionais da RT-PCR e PCR em Tempo Real definiram os padrões de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo, taxa de falso positivo, valor presuntivo positivo, razão de detecção, índice de Youden, razão de erro, erro combinado, razão de verossimilhança positiva e negativa. Observou-se que as amostras positivas por RT-PCR, quando analisadas por meio da metodologia de PCR em Tempo Real, apresentaram uma carga viral mais elevada do que negativas. Observou-se um predomínio de amostras positivas nos intervalos de idades de 7 a 14 anos (41%) e 4 a 6 anos (28,6%), uma paciente de 3 meses apresentou infecção mista por EBV e EV. Ocorreu uma maior circulação dos EV e HPeV nos meses de verão. Por meio do ensaio de sequenciamento genômico observou-se a ocorrência dos tipos virais echovirus 30, echovirus 4 e HPeV. Sendo este o o primeiro relato da circulação do HPeV no Estado do Paraná. Houve uma predominância de amostras negativas (89%), indicando que alguns fatores limitaram a detecção do genoma viral. Observou-se que as amostras negativas apresentaram um número de hemácias significativamente maiores, o tempo de coleta após o inicio dos sintomas, nessas amostras foi menor em relação às amostras positivas. Além disso, outros agentes, como, bactérias, fungos e parasitas podem ser agentes etiológicos das meningites. Neste estudo, utilizou-se as metodologias de RT-PCR e PCR em Tempo Real para a identificação dos EV e HPeV nas amostras de LCR nos pacientes com suspeita clínica de meningite viral. A genotipagem por meio da metodologia de RT-PCR e o sequenciamento genômico da porção VP1 apresentaram as vantagens de conveniência, rapidez e acurácia. O quê permitirá a investigação dos EV ou HPeV e os diferentes sorotipos ou genótipos associados a surtos e complicações clínicas.Abstract: Neurotropic enteroviruses are important human pathogens of meningitis and around 90% of the cases are due to coxsackievirus and echovirus. In Curitiba approximately 50% of hospitalization cases of meningitis are attributed to viruses which were diagnosing mainly (46%) based on differential cell count of cerebrospinal fluid (CSF). The aim of the study was to define the epidemiological profile and the molecular characterization of enterovirus (EV) and human parechovirus HPeV, in CSF samples collected from patients with signs and symptoms of viral meningitis. A total of 440 CSF samples were collected from three hospitals in the period of July 2005 to June 2006. The detection of the genomic portion 5' non-coding (5’NCR) of the EV genome was performed using reverse transcription followed by PCR (RT-PCR). In addition, VP1 gene was amplified for further phylogenetic analysis. Cellular and biochemical characteristics of CSF, as well as, epidemiological were also analyzed. EV or HPeV were detected in 49/440 (11%) of the by RT-PCR methodology. Some were analyzed by the methodology of real time PCR. The analysis of the operational characteristics of the RT-PCR and Real-Time PCR include the following parameters of sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, false positive rate, value presumptive positive rate of detection, Youden index, ratio error, combined error, likelihood ratio positive and negative. Positive samples for EV and HPeV by RT-PCR showed higher viral load than negative samples. There was a predominance of positive samples in the range of age 7 to 14 years (41%) and 4 to 6 years (28.6%). A patient with three months old presented mixed infection by EBV and EV. A higher circulation of the EV and HPeV was observed during the summer months. By genomic sequencing the types: echovirus 30, echovirus 4 and HpeV were detected. The predominance of negative results (89%) in the study indicates that some factors limited the detection of viral genome in CSF samples. In fact, negative samples had a significantly higher number of red blood cells and the collection time after the onset of symptoms in these samples was lower compared to the positive samples. In addition, other agents, such as bacteria, fungi and parasites could also be related to the etiologic agents of meningitis. In this study, it were used the methodologies of RTPCR and real time PCR to identify EV and HPeV in CSF samples from patients suspected of viral meningitis. The genotyping by RT-PCR and VP1 sequencing have the advantage of convenience, speed and accuracy. This will allow examination of EV or HPeV and serotypes or genotypes associated with outbreaks and significant disease witn clinical complications.481f. : il. 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