Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Veiga, Andressa
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/43389
Resumo: Orientador : Prof. Dr. Fabio Seigi Murakami
id UFPR_2a529bbe6c27306b9e7032a6ce9b52c3
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/43389
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Veiga, AndressaGonçalves, Alan Guilherme, 1975-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasMurakami, Fábio Seigi, 1981-2020-07-17T00:21:40Z2020-07-17T00:21:40Z2016https://hdl.handle.net/1884/43389Orientador : Prof. Dr. Fabio Seigi MurakamiCoorientador : Prof. Dr. Alan Guilherme GonçalvesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 29/02/2016Inclui referências : f. [88-96]Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: A crescente preocupação com o aparecimento de bactérias multirresistentes e a necessidade de se buscar novos compostos com atividade antimicrobiana, exigem, com fundamental importância, o desenvolvimento e o aprimoramento de técnicas capazes de determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de antimicrobianos. A determinação da CIM pode ser realizada por técnicas de diluição em caldo (macrodiluição e microdiluição), e atualmente, a técnica de microdiluição vem sendo amplamente utilizada por economizar meios de cultura, reagentes e, também, por utilizar pequenas quantidades dos compostos a serem testados. Outra vantagem do uso da microdiluição é a facilidade em adquirir, simultaneamente, grande quantidade de dados. No entanto, não existe uma padronização da técnica de microdiluição, principalmente com relação à utilização de indicadores de crescimento microbiano, ao tipo de leitura utilizado e às condições de incubação empregadas. Essa falta de harmonização da metodologia pode acarretar em diferenças na determinação da CIM dos compostos. Também não está descrito na literatura um método colorimétrico capaz de transformar valores de absorbância obtidos por leitura espectrofotométrica em concentração de micro-organismos viáveis (UFC/mL). Diante desse quadro, o objetivo do presente trabalho foi a padronização e validação de um método de microdiluição colorimétrico e quantitativo capaz de determinar a CIM de compostos antimicrobianos. Para tanto, após pesquisas na literatura, o cloreto de 2,3,5 trifeniltetrazólio (TTC) foi selecionado como indicador de crescimento ideal. Para definir a concentração a ser utilizada, foram realizados testes para verificar a toxicidade e a sensibilidade do TTC frente aos micro-organismos testados: Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) e Candida albicans (ATCC 10231). Após ensaios preliminares em tubos, as condições estabelecidas para o método foram: a utilização de solução de TTC 0,125% (p/v), adicionada após 22 horas de incubação à 35°C, seguida de mais 2 horas de incubação e subsequente leitura em espectrofotômetro. O método foi validado e demonstrou linearidade (R2>0,95), precisão (DPR <26 %), exatidão (75 % a 122 %) e robustez. Os parâmetros validados garantem a harmonização da metodologia para determinar não somente a CIM como também as concentrações inibitórias de 50 % (CI50%) e 90 % (CI90%) dos micro-organismos. Além disso, em razão da fácil inserção na rotina laboratorial e devido à economia de espaço, de tempo, e de meios de cultura, sugere-se a aplicação do método padronizado e validado para a investigação de compostos com potencial atividade antimicrobiana provenientes das mais diversas fontes. Palavras-chave: Validação; Microdiluição; Cloreto de 2,3,5 trifeniltetrazólio (TTC); Quantificação de micro-organismos.Abstract: The growing concern with the emergence of multi-resistant bacteria and the investigation of new compounds with antimicrobial activity, the development of new methodologies to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of antibiotics is fundamental importance. The MIC assay can be performed using broth dilution techniques (macrodilution and microdilution), and currently, the microdilution has been widely used for saving culture media, reagents and using small amounts of compounds for testing. Another advantage is the easier way to acquire large amount of data simultaneously. In fact, there is no standardization of microdilution method, mainly regarding about growing indicators, the reading and the incubation conditions. This absence of methodology harmonization can lead in differences on MIC of the compounds. Furthermore, in the literature it is not described a colorimetric method able to transform absorbance values obtained by spectrophotometric reading to concentration of viable organisms (CFU / mL). In this context, the major purpose of this work was to develop and validate a microdilution colorimetric method able to determine the MIC of antimicrobial compounds. Therefore, after searching on the literature, 2,3,5 triphenyltetrazolium chloride (TTC) was selected as optimal growing indicator. In order to set the concentration, several tests were carried out, to verify the toxicity and the sensibility of the TTC against the following microorganisms: Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) and Candida albicans (ATCC 10231). After preliminary tests on tubes, the conditions defined for the method were: using a TTC solution of 0,125% (w / v), added after 22 hours of incubation at 35 °C followed by further 2 hours of incubation and subsequent reading in spectrophotometer. The method was validated and showed linearity (R2> 0.95), precision (RSD <26 %), accuracy (75 % to 122 %) and robustness. The validated parameters have ensure the harmonization of the methodology to determine not only the MIC, but also the inhibitory concentration of 50 % (IC50%) and of 90 % (IC90%) of microorganisms. Moreover, due the easier insertion in the laboratory routine and because of the economy of space, time, and culture media, we suggest the implementation of standardized and validated method for the investigation of compounds with potential antimicrobial activity from the most diverse sources. Keywords: Validation; Microdilution; 2,3,5 triphenyltetrazolium chloride (TTC); Quantification of microorganisms.96 f. : il. algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalFarmáciaDesinfecção e desinfetantesBactériasPadronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - ANDRESSA VEIGA.pdfapplication/pdf2428794https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/1/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdfd8b52ad0dbdfcd3bbf2172188a4de8afMD51open accessTEXTR - D - ANDRESSA VEIGA.pdf.txtExtracted Texttext/plain169251https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/2/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdf.txtd302d05c4e5365f845e7a8b698dac9c4MD52open accessTHUMBNAILR - D - ANDRESSA VEIGA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1344https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/3/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdf.jpg483dbcf095b8579872c43d7c73b9feb2MD53open access1884/433892020-07-16 21:21:40.137open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/43389Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082020-07-17T00:21:40Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
title Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
spellingShingle Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
Veiga, Andressa
Farmácia
Desinfecção e desinfetantes
Bactérias
title_short Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
title_full Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
title_fullStr Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
title_full_unstemmed Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
title_sort Padronização e validação do método de microdiluição para determinação da concentração inibitória mínima de compostos antimicrobianos
author Veiga, Andressa
author_facet Veiga, Andressa
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Gonçalves, Alan Guilherme, 1975-
Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
dc.contributor.author.fl_str_mv Veiga, Andressa
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Murakami, Fábio Seigi, 1981-
contributor_str_mv Murakami, Fábio Seigi, 1981-
dc.subject.por.fl_str_mv Farmácia
Desinfecção e desinfetantes
Bactérias
topic Farmácia
Desinfecção e desinfetantes
Bactérias
description Orientador : Prof. Dr. Fabio Seigi Murakami
publishDate 2016
dc.date.issued.fl_str_mv 2016
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2020-07-17T00:21:40Z
dc.date.available.fl_str_mv 2020-07-17T00:21:40Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/43389
url https://hdl.handle.net/1884/43389
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 96 f. : il. algumas color.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/1/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdf
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/2/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43389/3/R%20-%20D%20-%20ANDRESSA%20VEIGA.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv d8b52ad0dbdfcd3bbf2172188a4de8af
d302d05c4e5365f845e7a8b698dac9c4
483dbcf095b8579872c43d7c73b9feb2
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1801860300536807424

Registros relacionados