Caracterização do RNA dupla fita em Guignardia citricarpa e validação do protocolo de cura

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silvano, Caroline, 1986-
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/30169
Resumo: Orientador: Vanessa Kava-Cordeiro
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spelling Silvano, Caroline, 1986-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasKava, Vanessa, 1968-2022-08-22T13:39:52Z2022-08-22T13:39:52Z2008https://hdl.handle.net/1884/30169Orientador: Vanessa Kava-CordeiroMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : O fungo Guignardia citricarpa é um fitopatógeno de extrema importância para a citricultura brasileira, por ser o agente causal da Mancha Preta dos Citros (MPC). Recentemente, foi relatada a infecção por vírus de RNA dupla-fita (RNAdf) em diferentes linhagens dessa espécie. Algumas dessas linhagens foram submetidas à cura deste RNAdf por meio de repiques sucessivos de ponta de hifa, após incubação por 21 dias com temperatura moderamente elevada para este gênero (37ºC), a fim de evidenciar a influência deste elemento nestes fungos. Com este tratamento foram obtidas colônias aparentemente curadas. Este trabalho teve como objetivos obter isolados de G. citricarpa de plantas cítricas da região de Paranavaí-PR; identificar ao nível de espécie os isolados obtidos; detectar RNAdf nestes novos isolados; curar isolados de seu RNAdf; avaliar a eficácia da técnica de repiques sucessivos de ponta de hifa associada à temperatura moderamente elevada (37ºC) para a cura de RNAdf do fungo G. citricarpa e avaliar metodologias para detectar linhagens compatíveis de G. citricarpa, para identificar possível transferência horizontal do RNAdf. Após três etapas de isolamento de citros foi obtido um isolado de Guignardia e vários fungos de outros gêneros. Este isolado foi identificado como G. citricarpa por meio de características morfológicas macroscópicas e microscópicas e também por teste do halo em meio aveia. Também foi feita uma PCR ("Polymerase Chain Reaction") do tipo "multiplex", com primers espécie-específicos para G. citricarpa e G. mangiferae com resultado positivo de amplificação para G. citricarpa. Este isolado foi submetido a uma purificação de ácidos nucléicos e após a eletroforese, uma banda semelhante à descrita anteriormente de RNAdf foi visualizada. No entanto, seis meses depois, uma nova purificação foi realizada e a banda extra não foi mais observada na eletroforese. Acredita-se que o não aparecimento dessa banda é resultado de uma baixa titulação de moléculas de RNAdf. O processo de cura deste isolado ainda está em andamento. As colônias curadas, obtidas anteriormente por outros autores, foram submetidas a novas extrações de ácidos nucléicos totais para avaliar a eficácia do protocolo utilizado. Em algumas linhagens consideradas curadas, foi possível observar novamente uma banda extra, com tamanho semelhante à banda anteriormente identificada como de RNAdf. Nestes casos, ao invés da cura completa, deve ter ocorrido uma diminuição na titulação das moléculas de RNAdf durante o tratamento que não foi detectada na eletroforese. Com o tempo, ocorreu um aumento significativo no número destas partículas virais, o que tornou novamente possível a visualização da banda de RNAdf. Estes resultados mostram que a eletroforese em gel de agarose 1% para detectar a presença de RNAdf pode não ser um método eficiente, sendo necessário a utilização de outras técnicas mais precisas. O teste de compatibilidade vegetativa foi feito pelo crescimento pareado em placa de Petri, deixando a distância de 2 ou 1 centímetros entre os inóculos que sempre foram de uma linhagem com RNAdf e outra sem. Em todos os ensaios foi possível identificar o encontro das hifas, porém não foram observadas anastomoses entre as hifas.1 recurso online : PDF.application/pdfExigências do sistema: Adobe Acrobat ReaderGuignardia citricarpaÁcido ribonucleicoCaracterização do RNA dupla fita em Guignardia citricarpa e validação do protocolo de curainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALMonografia Caroline Silvano.pdfapplication/pdf2502084https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30169/1/Monografia%20Caroline%20Silvano.pdf94a91938019a5008c499b5c7c7d184d7MD51open accessTEXTMonografia Caroline Silvano.pdf.txtExtracted Texttext/plain106398https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30169/2/Monografia%20Caroline%20Silvano.pdf.txt27b141a6bf26eeeccdf46b830a6a1871MD52open accessTHUMBNAILMonografia Caroline Silvano.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1167https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30169/3/Monografia%20Caroline%20Silvano.pdf.jpg4aa6862055a292c244a0cefdfa79cefbMD53open access1884/301692022-08-22 10:39:52.577open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/30169Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-08-22T13:39:52Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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