Identificação e clonagem de genes de celulases e hemicelulases de Azospirillum brasiliense

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Scarduelli, Marcelo
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/37134
Resumo: Orientadora : Profª Drª Emanuel Maltempi de Souza, Prof. Dr. Luciano Fernandes Huergo
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spelling Scarduelli, MarceloHuergo, Luciano FernandesFaoro, HelissonUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Souza, Emanuel Maltempi de, 1964-2015-01-29T16:32:42Z2015-01-29T16:32:42Z2014http://hdl.handle.net/1884/37134Orientadora : Profª Drª Emanuel Maltempi de Souza, Prof. Dr. Luciano Fernandes HuergoCo-orientadores : Dr.Helisson FaoroDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2014Inclui referênciasResumo: Celulases apresentam diversas utilidades industriais, desde uso em etapas de polimento de tecidos até produção de biocombustíveis, especialmente de bioetanol de 2ª geração. Na busca por novas celulases, a prospecção em bactérias colonizadoras de plantas pode levar a identificação de enzimas particulares. Este trabalho teve como objetivo identificar, expressar e caracterizar genes de possíveis celulases e hemicelulases presentes no genoma de Azospirillum brasilense, uma bactéria colonizadora de rizosfera de gramíneas. Genes codificando glicosil-hidrolases foram identificados por comparação de sequências. Os genes identificados foram posteriormente clonados e expressos em E. coli. Dos 10 genes codificando prováveis glicosil hidrolases, 4 foram clonados em vetor de expressão. Dois dos plasmídeos obtidos, contendo genes de uma celulase e uma hemicelulase, permitiram superexpressar as proteínas recombinantes em E.coli que foram purificadas com sucesso. Porém, as 4 enzimas não demonstraram atividade de degradação celulolítica ou hemicelulolítica. Com a finalidade de se identificar se realmente há enzimas com atividade de degradação de celulose ou xilana em A. brasilense, a bactéria foi cultivada em meios específicos contendo apenas celulose ou xilana como fonte de carbono. Evidência de crescimento foi observada apenas na presença de xilana, o que leva a crer que há maquinaria ativa capaz de degradar este polímero em A. brasilense estirpe FP2. Palavras-chave: celulases, xilanases, Azospirillum brasilense.Abstract: Cellulases have many industrials uses, from polishing fabrics to biofuel production, especially second generation bioethanol. Searching for new cellulases, bioprospection in plant-root-colonizing bacteria could lead to discover novel enzymes. This study aimed to identify and characterize possible cellulolytic and hemicellulolytic enzymes in genome of Azospirillum brasilense. Sequence comparison was used for identification of glycosyl hydrolases (cellulases and xylanases) in the A. brasilense draft genome. Four out of 10 selected genes were cloned and overexpressed in E. coli. Of these four, a probable cellulase and a hemicellulase were purified successfully. However, the four enzymes had no degradation activity. In order to determine if A. brasilense is capable of degrading cellulose or xylan, the bacterium was grown in media containing either cellulose or xylan as sole carbon source. Only xylan sustained A. brasilense growth, suggesting the presence of active machinery capable for degrading this polymer in A. brasilense strain FP2. Key-words: cellulases, xylanases, Azospirillum brasilense.79f. : il. algumas color., tabs., grafs.application/pdfDisponível em formato digitalTesesAzospirillum brasilienseCelulaseBioquímicaIdentificação e clonagem de genes de celulases e hemicelulases de Azospirillum brasilienseinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - MARCELO SCARDUELLI.pdfapplication/pdf1884081https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37134/1/R%20-%20D%20-%20MARCELO%20SCARDUELLI.pdf1416cd68879cf118679551b96fa7948eMD51open accessTEXTR - D - MARCELO SCARDUELLI.pdf.txtR - D - MARCELO SCARDUELLI.pdf.txtExtracted Texttext/plain130678https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37134/2/R%20-%20D%20-%20MARCELO%20SCARDUELLI.pdf.txtd17a268978d8351a3f3192165bc0b26bMD52open accessTHUMBNAILR - D - MARCELO SCARDUELLI.pdf.jpgR - D - MARCELO SCARDUELLI.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1321https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37134/3/R%20-%20D%20-%20MARCELO%20SCARDUELLI.pdf.jpgd5709f2c5de03fca1e8d94a1db3f9a98MD53open access1884/371342015-11-24 08:55:53.545open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/37134Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082015-11-24T10:55:53Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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