Purificação e caracterização de uma celulase de Azospirillum brasilense
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Data de Publicação: | 2015 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | https://hdl.handle.net/1884/41610 |
Resumo: | Orientadora: Rose Adele Monteiro |
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Cassilha, Bruno Afonso Ramos, 1990-Scarduelli, Marcelo, 1987-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasMonteiro, Rose Adele, 1973-2022-08-19T15:45:19Z2022-08-19T15:45:19Z2015https://hdl.handle.net/1884/41610Orientadora: Rose Adele MonteiroCoorientadora: Marcelo ScarduelliMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : A biomassa lignocelulósica constitui um dos materiais biológicos mais abundantes do planeta, sendo de grande interesse comercial a obtenção de enzimas capazes de degradá-la. As celulases e hemicelulases conseguem cumprir esse papel, podendo ser utilizadas em diversos processos industriais, como a produção de biocombustíveis (principalmente o etanol de 2ª geração), biopolimento e remoção de cor em têxteis, clarificação de sucos e outros métodos da indústria alimentícia. Existem três tipos diferentes de celulases, as endoglucanases, as exoglucanases e as ß-glucosidases, que atuam conjuntamente na quebra das fibras de celulose até glicose. O objetivo deste trabalho é purificar e caracterizar uma ß-glucosidase proveniente da bactéria promotora de crescimento vegetal Azospirillum brasilense. O gene que codifica para essa proteína já foi isolado, sequenciado e clonado no plasmideo de expressão pET28. A purificação da proteína foi feita por cromatografia de afinidade em uma coluna de níquel de 1ml, a determinação da atividade da enzima foi feita utilizando o substrato p-nitrofenil-ß-D-glicopiranosídeo (1 mM) que quando clivado por ß-glucosidases libera um composto (paranitrofenol) com coloração amarela que pode ser quantificado por colorimetria. A enzima apresentou boa atividade entre os pHs 7 e 9, sendo mais ativa no pH 8, não precisou de um cofator para catalisar a reação, os íons Ca²+ , Mg2+ e Cu2+ não causaram alterações na atividade, assim como o EDTA, portanto acreditamos que ela também não possui um metal na sua estrutura. A enzima perdeu toda atividade quando incubada por 30 minutos a 60ºC e depois testada a 37ºC, ela foi mais ativa quando incubada no gelo e depois testada a 55ºC. A ß-glucosidase parece ser bastante halotolerante, suportando concentrações de até 1M de NaCl sem perder muita atividade, na concentração de 2M apresenta 67% da atividade e na de 6M, 27%. A enzima apresentou uma temperatura de desnaturação de 58,7ºC. Não foi possível determinar por microscopia eletrônica se a enzima está relacionada com a colonização de A. brasilense na planta.1 recurso online : PDF.application/pdfExigências do sistema: Adobe Acrobat ReaderAzospirillum brasilenseCelulasePurificação e caracterização de uma celulase de Azospirillum brasilenseinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALMonografia Bruno Afonso Ramos Cassilha.pdfapplication/pdf1457400https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41610/1/Monografia%20Bruno%20Afonso%20Ramos%20Cassilha.pdf932ded85dc5572ab1b33c2908723e6aeMD51open accessTEXTMonografia Bruno Afonso Ramos Cassilha.pdf.txtExtracted Texttext/plain53891https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41610/2/Monografia%20Bruno%20Afonso%20Ramos%20Cassilha.pdf.txt196ce938a5b650fe19564200e8da26efMD52open accessTHUMBNAILMonografia Bruno Afonso Ramos Cassilha.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1091https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41610/3/Monografia%20Bruno%20Afonso%20Ramos%20Cassilha.pdf.jpg52186c073887d799c9eaae4475a35f8cMD53open access1884/416102022-08-19 12:45:19.604open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/41610Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-08-19T15:45:19Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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