Identificação e caracterização de genes envolvidos na reprodução sexuada do fungo ascomiceto Phyllosticta citricarpa

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Amorim, Renata
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/43744
Resumo: Orientadora : Profª Drª Chirlei Glienke
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spelling Amorim, RenataUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em GenéticaGlienke, Chirlei2019-02-19T18:12:40Z2019-02-19T18:12:40Z2015https://hdl.handle.net/1884/43744Orientadora : Profª Drª Chirlei GlienkeDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 22/09/2015Inclui referências : f.52-57;59-67Área de concentraçãoResumo: A reprodução sexual em fungos é controlada pelos genes mating type presentes no locus MAT, que é representado por dois idiomorfos - MAT1-1 e MAT1-2. Em espécies heterotálicas há a presença exclusiva de um dos dois idiomorfos, necessitando o encontro de linhagens com mating types opostos para que ocorra a reprodução sexuada. Em contrapartida, espécies homotálicas possuem ambos os idiomorfos em seu genoma, conferindo a esses indivíduos a capacidade de se reproduzir sem necessariamente precisarem de um parceiro compatível. Nesse trabalho nós investigamos a estrutura do locus MAT em Phyllosticta citricarpa, o agente causal da Mancha Preta dos Citros (MPC). Essa doença causa lesões em frutos e folhas de plantas de citros, onde podem ser encontrados esporos assexuados do fungo (picnidiósporos), enquanto que os esporos sexuados (ascósporos), que são a principal fonte de dispersão da doença em campo, são encontrados em folhas caídas em estado de decomposição no solo. Apesar de intensivo estudo, seu ciclo sexual nunca foi observado em cultura pura in vitro. Através da análise das sequências genômicas de dois isolados de P. citricarpa, foi identificado o gene da DNA lyase e, como previamente descrito na literatura, os genes mating type estavam localizados na região flanqueadora 3' desse gene. Os resultados evidenciam que esse fungo é heterotálico devido à presença exclusiva de MAT1-1 ou MAT1-2 em linhagens distintas. A fim de caracterizar o locus MAT, foram desenhados primers para amplificação dessa região. Com base nesses resultados foi demonstrado que P. citricarpa possui cópias completas e aparentemente funcionais dos genes mating type, contendo os domínios de alta mobilidade (High Mobility Group - HMG) e alpha box, presentes em diferentes isolados. Além dos genes MAT1-1-1 e MAT1-2-1, foram localizados os genes MAT1-1-4 na região flanqueadora 5' do gene MAT1-1-1 e o gene MAT1-2-5, localizado na região flanqueadora 5' do gene MAT1-2-1. Um protocolo de PCR multiplex foi desenvolvido para diferenciar os idiomorfos de P. citricarpa, podendo ser utilizado em estudos de distribuição e incidência de genes mating type, a fim de determinar a ocorrência de reprodução sexual e facilitar estudos de cruzamento in vivo e in vitro. Palavras-chave: Phyllosticta citricarpa, Mancha Preta dos Citros, reprodução sexual, genes mating type.Abstract: Sexual reproduction in fungi is controlled by mating type genes located at the MAT locus, which is represented by two idiomorphs - MAT1-1 and MAT1-2. In heterothallic species there is the presence of only one of the two idiomorphs, requiring the encounter of opposite mating types strains to occur sexual reproduction. In contrast, homothallic species have both idiomorphs in its genome, giving these individuals the ability to reproduce without necessarily requiring a compatible partner. In this study, we investigated the structure of this locus in the phytopathogenic fungus Phyllosticta citricarpa, the epidemiological agent of citrus black spot (CBS) disease. This disease causes lesions on fruits and leaves of citrus plants, where can be found asexual spores of the fungus (picnidiospores), while sexual spores (ascospores), which are the major source of spreading the infection in the field, are found in fallen leaves in state of decomposition. Despite intensive study, its sexual state has never been observed in single-spore culture. Through analysis of the genome sequences of two individual P. citricarpa isolates, the sequence of the DNA lyase gene was identified and, as previously reported in the literature, the mating type genes were located in the 3' flanking region of this gene. The results suggested that P. citricarpa is heterothallic (self-sterile), owing to the exclusive presence of the MAT1-1 or MAT1-2 gene in individual strains. In order to characterize the MAT locus, we designed primers to amplify this region. Based on this analysis, P. citricarpa was found to have complete and apparently functional copies of MAT genes, containing ?-1 and HMG domains, present in different isolates. In addition to MAT1-2-1 and MAT1-1-1 genes, the MAT1-1-4 gene was located in the 5' flanking region of the MAT1-1-1 gene and the MAT1-2-5 gene was located in 5' flanking region of the MAT1-2-1 gene. A multiplex PCR protocol was also developed to differentiate P. citricarpa idiomorphs, which can be used in distribution and incidence studies of mating type strains, in order to determine the occurrence of sexual reproduction and to facility crossing studies in vitro and in vivo. Keywords: Phyllosticta citricarpa, Citrus Black Spot, sexual reproduction, mating type genes.89 f. : il., algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalGenéticaAscomicetosFungos - ReproduçãoIdentificação e caracterização de genes envolvidos na reprodução sexuada do fungo ascomiceto Phyllosticta citricarpainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessTHUMBNAILR - D - RENATA AMORIM.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1164https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43744/1/R%20-%20D%20-%20RENATA%20AMORIM.pdf.jpg0965af1b54adc548b4be3cde68a592c7MD51open accessTEXTR - D - RENATA AMORIM.pdf.txtExtracted Texttext/plain136923https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43744/2/R%20-%20D%20-%20RENATA%20AMORIM.pdf.txt03f29d21ec0af131980a72607a026625MD52open accessORIGINALR - D - RENATA AMORIM.pdfapplication/pdf1834435https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43744/3/R%20-%20D%20-%20RENATA%20AMORIM.pdfef9a0c176dd9362edc015266a2b42745MD53open access1884/437442019-02-19 15:12:40.334open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/43744Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082019-02-19T18:12:40Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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