Armazenamento de sementes, germinação in vitro e micropropagação de Hadrolaelia grandis (Lindley & Paxton) Chiron & V. P. Castro (Orchidaceae)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vudala, Sirlene Maria
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/41269
Resumo: Orientadora : Profª. Drª. Luciana Lopes Fortes Ribas
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spelling Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em BotânicaRibas, Luciana Lopes Fortes, 1964-Vudala, Sirlene Maria2022-12-19T13:44:12Z2022-12-19T13:44:12Z2015https://hdl.handle.net/1884/41269Orientadora : Profª. Drª. Luciana Lopes Fortes RibasDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica. Defesa: Curitiba, 24/08/2015Inclui referências : f. 21-25-47-50-78-81Resumo: Hadrolaelia grandis está ameaçada de extinção e sua população está em declínio devido às coletas para fins ornamentais e destruição do habitat. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de conservação de sementes, germinação in vitro e de propagação de H. grandis, em larga escala, utilizando a técnica "thin cell layer" (TCL) a partir de protocormos. O teste do tetrazólio (TZ) e a germinação in vitro foram realizados com sementes armazenadas a - 20 °C e - 80 °C, por 24, 30 e 36 meses. Os meios de cultura Woody Plant Medium (WPM), Murashige & Skoog (MS), Vacin & Went (VW) e Knudson C (KC) foram testados para a germinação in vitro e desenvolvimento dos protocormos. Para a regeneração de estruturas semelhantes à protocormos ("protocorm like bodies - PLBs") utilizando a técnica TCL foram realizadas secções transversais (TCLt) e secções longitudinais (TCLl) em protocormos com 60 e 90 dias de idade. Os explantes foram cultivados em meio Woody Plant Medium (WPM), acrescido de 6-benzilaminopurina (BAP): 1,1; 2,2; 4,4; 8,8 e 17,6 ?M, além do controle, sem regulador vegetal. O alongamento e enraizamento dos PLBs foi induzido em meio contendo carvão ativado (0; 1; 2 e 3 g.L-1) ou ácido indol-3-butírico (AIB) (0,0; 1,25; 2,5; 5,0 e 10,0 M). As mudas foram transplantadas em bandejas contendo: pó de coco, casca de pínus com húmus de minhoca e vermiculita. Os resultados indicaram que a temperatura de - 80 °C foi mais eficiente para o armazenamento de sementes, pois após 36 meses, a porcentagem de sementes viáveis foi mais elevada (81,86%), quando comparada a de - 20 °C (64,24%) pelo teste TZ. As sementes cultivadas no meio WPM apresentaram melhores respostas de germinação (94,71%, índice de velocidade de germinação de 25,33) e de desenvolvimento das plântulas, após 36 meses de armazenamento em temperatura de - 80 °C. A técnica TCL foi eficiente para a propagação in vitro de H. grandis, sendo que a idade e concentração de BAP influenciaram as respostas de regeneração de PLBs. Secções transversais de protocormos de 60 dias, cultivados em meio WPM, acrescido de 2,2 M de BAP apresentaram melhores respostas para a técnica TCLt (70,8% de regeneração de PLBs e 30,1 PLBs por explante). Para a técnica TCLl foi recomendado o uso de secções de protocormos de 90 dias de idade, cultivadas em meio contendo 8,8 M de BAP (83,3% de regeneração de PLBs e 34,4 PLBs por explante). O carvão ativado foi eficiente no alongamento e enraizamento, sendo recomendada a concentração de 1 g L-1. As mudas foram aclimatizadas com sucesso em casa de vegetação (98,21% de sobrevivência) utilizando vermiculita como substrato. O protocolo descrito nesse estudo foi eficiente para conservação de sementes, germinação in vitro e micropropagação utilizando a técnica TCL para a produção de mudas de H. grandis. Palavras chave: banco de sementes, viabilidade de sementes, "thin cell layer", regeneração de PLBs, 6-benzilaminopurina (BAP)Abstract: Hadrolaelia grandis is an endangered species and its population is declining due irregular collection for ornamental purposes and habitat destruction. The objective of this study was to establish a seed conservation protocol, in vitro germination and large-scale propagation of H. grandis seedlings using the "thin cell layer" (TCL) technique from protocorms. The tetrazolium test (TZ), and in vitro germination were performed with seeds stored at - 20 ° C and - 80 ° C for 24, 30 and 36 months. The culture media Woody Plant Medium (WPM), Murashige and Skoog (MS) Vacin & Went (VW) and Knudson C (KC) were tested for in vitro germination and protocorm development. For the regeneration of the protocorm-like bodies (PLBs) using TCL technique, transversal sections were performed (tTCL) and longitudinal sections (lTCL) in protocorm from 60 and 90 days of age. The explants were cultured in Woody Plant Medium (WPM), supplemented with 6-benzylaminopurine (BAP): 1.1, 2.2, 4.4, 8.8 and 17.6 ?M, and the control without plant growth regulation. The elongation and rooting of PLBs were induced in medium containing activated charcoal (0, 1, 2 and 3 g L-1) or indole-3-butyric acid (IBA) (0.0, 1.25, 2.5, 5.0 and 10.0 ?M). The seedlings were transplanted into trays containing: coco powder, pine bark with humus worm and vermiculite. The results indicated that the temperature of - 80 °C was more efficient for storing seeds, because after 36 months, the percentage of viable seeds was higher (81.86%), when compared to - 20 °C (64.24%) by TZ test. The seeds grown in the WPM medium showed better germination responses (94.71%, 25.33 germination speed index) and seedling development, after 36 months of storage at a temperature of - 80 °C. The TCL technique was efficient for the in vitro propagation of H. grandis, and the age and concentration of BAP influenced PLBs regeneration responses. Transversal sections from protocorm of 60 days old, cultured in WPM supplemented with 2.2 M BAP responded better to tTCL technique (70.8% of PLBs PLBs regeneration and 30.1 per explant). For lTCL technique has been recommended to use sections from protocorm 90 days old, grown in medium containing 8.8 M of BAP (83.3% of PLBs regeneration PLBs and 34.4 per explant. The activated charcoal was effective for elongation and rooting of PLBs, and we recommended the concentration of 1 g L-1. The seedlings were successfully acclimatized in greenhouse (98.21% survival) using vermiculite as substrate. The protocol described in this study was efficient for conservation, seed germination and in vitro micropropagation using TCL technique for mass production of H. grandis seedlings. Keywords: seed banks, seed viability, thin cell layer, PLBs regeneration, 6-benzylaminopurine (BAP)89 f. : il. algumas color., tabs., grafs.application/pdfDisponível também em formato digitalBotanicaOrquideaBancos de sementesSementes - ViabilidadeArmazenamento de sementes, germinação in vitro e micropropagação de Hadrolaelia grandis (Lindley & Paxton) Chiron & V. P. Castro (Orchidaceae)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - SIRLENE MARIA VUDALA.pdfapplication/pdf1750443https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41269/1/R%20-%20D%20-%20SIRLENE%20MARIA%20VUDALA.pdf8e0f3d4b13f79db24146cf9b11b4d4beMD51open accessTEXTR - D - SIRLENE MARIA VUDALA.pdf.txtExtracted Texttext/plain157218https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41269/2/R%20-%20D%20-%20SIRLENE%20MARIA%20VUDALA.pdf.txt1f8284d2d108fe90377c5056dface9faMD52open accessTHUMBNAILR - D - SIRLENE MARIA VUDALA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1134https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41269/3/R%20-%20D%20-%20SIRLENE%20MARIA%20VUDALA.pdf.jpg3ddbd65e1fd3075de7b598357bf84fbaMD53open access1884/412692022-12-19 10:44:12.077open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/41269Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-12-19T13:44:12Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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