Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Steclan, Chelin Auswaldt
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/37053
Resumo: Orientadora : Profª. Drª. Lia Sumie Nakao
id UFPR_98122070182580954508b90c6f24c094
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/37053
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Steclan, Chelin AuswaldtUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e MolecularNakao, Lia SumieAppel, Marcia Helena2018-04-20T19:02:23Z2018-04-20T19:02:23Z2013http://hdl.handle.net/1884/37053Orientadora : Profª. Drª. Lia Sumie NakaoOrientadora : Profª. Drª. Marcia Helena AppelTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2013Inclui referênciasÁrea de concentração :BiologiaResumo: Quiescina/sulfidril oxidase isoforma 1b (QSOX1b) é uma enzima secretada, e catalisadora da oxidação de proteínas nascentes e mal dobradas. Esta oxidação induz a formação de pontes dissulfeto, que são cruciais para a conformação e estabilidade de diversas proteínas. A literatura propõe que a oxidação de proteínas intra e extracelular, ou aquelas de superfície celular, acarreta em mudanças no estado redox destes microambientes, e também em alterações conformacionais das micro e macroestruturas proteicas. Baseado nisso, tivemos como objetivo analisar o papel de QSOX1b recombinante de camundongo (mQSOX1b) como possível oxidase da fibronectina (FN), uma glicoproteína dimérica de matriz extracelular (MEC). Através das determinações de peróxido de hidrogênio e de tióis em ensaios cinéticos com mQSOX1b e FN reduzida (redFN), in vitro, constatamos que redFN é oxidada pela enzima. A constante de Michaelis menten medida foi de aproximadamente 456 nM (com uréia) e 290 nM (sem uréia). redFN, per se, auto fibrila, produzindo multímeros solubilizados por deoxicolato (DOC), contudo, verificamos que mQSOX1b acelera a formação destes multímeros. Estas estruturas fibrilares possuem massa molecular maior que 800 kDa, e são desfeitas por agentes redutores, mas não são desfeitas por DOC (2%), indicando que são mantidas por pontes dissulfeto. Os multímeros não afetam a interação de redFN com gelatina, como indicado por imunoensaio. Coatings com multímeros de FN (nativa e reduzida) não alteraram a capacidade adesiva de Rasm (células musculares lisas de aorta de rato), HeLa (células de câncer cervical, Henrietta Lacks) ou 3t3 (Fibroblasto de camundongo), contudo, a proliferação foi aumentada quando Rasm e HeLa foram incubados sobre natFN junto a mQSOX1b. Ao analisar a superexpressão da mQSOX1b sobre o estado redox da MEC e superfície celular nas linhagens Hek293t (células de rim de embrião humano para transfecção) e HeLa, pudemos constatar a promoção do estado mais oxidado para estes ambientes. Sendo assim, propomos para QSOX1b funções biológicas sobre a formação e remodelamento de componentes da MEC, aqui demonstrado especificamente sobre FN. Sendo assim, a presença de QSOX1 pode estar associada com o controle do crescimento e sobrevivência celular, tanto em situações fisiológicas quanto patológicas. Palavras chaves: Quiescina/Sulfidril Oxidase 1b (QSOX1b); Matriz extracelular (MEC); Fibronectina (FN); oxidação; estado redox.Abstract: Quiescin/Sulfhydryl Oxidase isoform 1b (QSOX1b) is a secreted enzyme, and catalyzes the oxidation of nascent and misfolded proteins. This oxidation leads to the formation of disulfide bonds which are critical to the conformation and stability of various proteins. The literature suggests that oxidation of intra-and extracellular proteins or those at cell surface leads to changes in the redox state of these microenvironments, as well as conformational changes in the protein micro and macrostructure. Based on that, we aimed to analyze the role of mouse recombinant QSOX1b (mQSOX1b) as a possible oxidase for fibronectin (FN), a dimeric glycoprotein of the extracellular matrix (ECM). In vitro, through enzyme kinetics assays and measurement of thiols in the presence of mQSOX1b and reduced FN (redFN), we found that redFN is oxidized by the enzyme. The KM values found were approximately 456 nM (urea) and 290 nM (without urea). FN multimers are also generated by auto fibrillation and can be solubilized by deoxycholate (DOC), however, we found that the QSOX1b accelerates the formation of these multimers. These fibrillar structures have molecular mass greater than 800 kDa, and are lost in the presence of reducing agents but not DOC (2%), indicating that multimers are maintained by disulfide bonds. The multimers forms no affect the gelatin-redFN interaction, indicated by ELISA. Coatings with multimers of FN (native and reduced FN) did not alter the adhesive capacity of Rasm, HeLa or 3T3, however, the proliferation was increased when Rasm and HeLa were incubated on natFN along mQSOX1b. Analyzing mQSOX1b overexpression influence on the ECM redox state and cell surface protein thiols at HEK293T and HeLa cells, we found more oxidized state for these environments. Therefore, we propose as biological functions to QSOX1b the formation and remodeling ECM components, here specifically FN. Thus, the presence of QSOX1 may be associated with cellular growth and survival control, probably in physiological and pathological conditions. Keywords: Quiescin/sulfhydryl oxidase 1b (QSOX1b), extracellular matrix (ECM), fibronectin (FN); oxidation; redox state.80f. : il., grafs.application/pdfDisponível em formato digitalTesesCitologia e biologia celularBiologia molecularOxidaçãoMatriz extracelularPapel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectinainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessTHUMBNAILR - T - CHELIN AUSWALDT STECLAN.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1384https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/1/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdf.jpgeb8192e7a70d467bfcf5643e65a3bc06MD51open accessTEXTR - T - CHELIN AUSWALDT STECLAN.pdf.txtExtracted Texttext/plain174027https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/2/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdf.txt1d2433b4e33c2ae45e1f168278e6d53eMD52open accessORIGINALR - T - CHELIN AUSWALDT STECLAN.pdfapplication/pdf6873498https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/3/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdfe3433ac6ed85e2e90d5b2225d16d8b74MD53open access1884/370532018-04-20 16:02:23.854open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/37053Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082018-04-20T19:02:23Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
title Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
spellingShingle Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
Steclan, Chelin Auswaldt
Teses
Citologia e biologia celular
Biologia molecular
Oxidação
Matriz extracelular
title_short Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
title_full Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
title_fullStr Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
title_full_unstemmed Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
title_sort Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
author Steclan, Chelin Auswaldt
author_facet Steclan, Chelin Auswaldt
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
dc.contributor.author.fl_str_mv Steclan, Chelin Auswaldt
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Nakao, Lia Sumie
Appel, Marcia Helena
contributor_str_mv Nakao, Lia Sumie
Appel, Marcia Helena
dc.subject.por.fl_str_mv Teses
Citologia e biologia celular
Biologia molecular
Oxidação
Matriz extracelular
topic Teses
Citologia e biologia celular
Biologia molecular
Oxidação
Matriz extracelular
description Orientadora : Profª. Drª. Lia Sumie Nakao
publishDate 2013
dc.date.issued.fl_str_mv 2013
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2018-04-20T19:02:23Z
dc.date.available.fl_str_mv 2018-04-20T19:02:23Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1884/37053
url http://hdl.handle.net/1884/37053
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 80f. : il., grafs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/1/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdf.jpg
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/2/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/37053/3/R%20-%20T%20-%20CHELIN%20AUSWALDT%20STECLAN.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv eb8192e7a70d467bfcf5643e65a3bc06
1d2433b4e33c2ae45e1f168278e6d53e
e3433ac6ed85e2e90d5b2225d16d8b74
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898678599942144

Registros relacionados