Microextração em fase líquida com fibra oca para determinação de fármacos em plasma humano por nanoLC-MS

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cestaro, Beatriz Isabella, 1994-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/61897
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Bruno José Gonçalves da Silva
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spelling Cestaro, Beatriz Isabella, 1994-Batista, Michel, 1979-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Exatas. Programa de Pós-Graduação em QuímicaSilva, Bruno José Gonçalves da, 1982-2019-08-08T21:37:16Z2019-08-08T21:37:16Z2019https://hdl.handle.net/1884/61897Orientador: Prof. Dr. Bruno José Gonçalves da SilvaCoorientador: Dr. Michel BatistaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química. Defesa : Curitiba, 21/02/2019Inclui referências: p.83-93Resumo: A determinação de fármacos em amostras biológicas, como plasma humano, pode ser feita com diferentes propósitos, dentre os quais cabe-se destacar o monitoramento terapêutico de fármacos e toxicologia forense. No entanto, devido à complexidade da matriz e à ligação de fármacos a proteínas, a etapa de preparo de amostra pode se tornar desafiadora. A microextração em fase líquida com fibra oca (HF-LPME) é uma técnica de preparo de amostra de baixo custo, que faz uso de quantidades mínimas de solventes orgânicos e apresenta excelente eficiência de clean-up e fatores de pré-concentração. Unida a nanocromatografia acoplada a espectrometria de massas (nanoLC-MS), que fornece análises de alta eficiência e detectabilidade, juntamente a identificação confiável dos analitos, as técnicas se tornam ideais para matrizes biológicas. Neste presente trabalho foi realizado o desenvolvimento de um método analítico para determinação de cinco fármacos em plasma humano empregando HF-LPME e nanoLC-MS. A separação cromatográfica dos cinco fármacos foi atingida fazendo uso de um gradiente 15 min, no qual a proporção acetonitrila:água varia de 30:70 à 100:0 (v/v), utilizando ácido fórmico 0,10% (v/v) como aditivo na fase móvel. O monitoramento dos fármacos foi realizado pelo modo fullscan, tanto para os íons precursores quanto para os íons produto. A extração fez uso de 250 ?L de plasma humano, os quais foram posteriormente avolumados a 10,0 mL com 10% de cloreto de sódio (m/v), 5% de metanol (v/v) em hidróxido de amônio (pH 10) como fase doadora. As demais condições de compromisso da HF-LPME são 20 ?L de 1-octanol como fase aceptora, agitação de 750 rpm e tempo de extração de 30 min. Por fazer uso de ferramentas de identificação dos analitos, como massa exata, perfil isotópico e perfil de fragmentação, o método desenvolvido pode ser empregado com seletividade e especificidade em análises de screening para a carbamazepina, diazepam, fluoxetina, haloperidol e trimetoprima em concentrações tão baixas quanto 20 ng mL- 1. Visando a aplicação do método para quantificação dos fármacos em amostras de plasma humano, foi observada linearidade satisfatória para carbamazepina, fluoxetina, haloperidol e trimetoprima, nas faixas de 0,06-2,5, 0,02-1,5, 0,25-2,5 e 0,02-2,5 ?g mL-1, respectivamente. Adicionalmente, foram observadas precisão e exatidão adequadas para o método, inferiores a ±15,0%, assim como limites inferiores de quantificação na faixa de 0,02 a 0,25 ?g mL-1 e taxas de recuperação na faixa de 3,00 a 95,4%. Dessa forma, o método analítico desenvolvido pode ser empregado com seletividade, especificidade, precisão e exatidão tanto em estudos clínicos para quantificação fluoxetina e trimetoprima, quanto em estudos forenses para quantificação de fluoxetina e haloperidol. Palavras-chave: nanoLC-MS. HF-LPME. Fármacos.Abstract: Pharmaceutical drugs determination in biological samples, such as human plasma, is conducted with different purposes, among which can be pointed out therapeutic drug monitoring and forensic toxicology. However, due to high matrix complexity and protein-drug binding, the sample preparation step can become challenging. Hollow fiber liquid phase microextraction (HF-LPME) is a sample preparation technique of low cost, which uses low amounts of organic solvents and displays excellent clean-up efficiency and pre-concentration factors. Put together with nano-liquid chromatography coupled to mass spectrometry (nanoLC-MS), which provides highly efficient analysis and high detectability, along with reliable analyte identification, these techniques become ideal for biological matrices. In this study an analytical method was developed for determination of five pharmaceutical drugs in human plasma using HF-LPME and nanoLC-MS. Chromatographic separation of the five pharmaceutical drugs was achieved by gradient elution step during 15 min, in which the acetonitrile:water proportion varied from 30:70 to 100:0 (v/v), using formic acid 0.10% (v/v) as an additive in the mobile phase. The pharmaceutical drugs were monitored by fullscan acquisition, both for precursor and product ion scans. Extraction took place using 250 ?L of human plasma, which was later avolumated to 10,0 mL with sodium chloride 10% (w/v), methanol 5% (v/v) and ammonium hydroxide (pH 10) as donator phase. The remaining optimal conditions for HF-LPME are 20 ?L of 1-octanol as acceptor phase, stirring rate of 750 rpm and extraction duration of 30 min. Due to the use of different identification tools, such as exact mass, isotopic profile and fragmentation profile, the developed method can be used with selectivity and specificity in screening analysis for carbamazepine, diazepam, fluoxetine, haloperidol and trimethoprim in concentrations as low as 20 ng mL-1. Aiming the application of the method for quantification of the selected pharmaceutical drugs in human plasma samples, satisfactory linearity was observed for carbamazepine, fluoxetine, haloperidol and trimethoprim in concentration ranges of de 0.06-2.5, 0.02-1.5, 0.25-2.5 e 0.02-2.5 ?g mL-1, respectively. Additionally, adequate precision and accuracy was observed for the method, reaching up to 15%, just as lower limits of quantification ranging from 0.02 to 0.25 ?g mL-1 and recovery rates from 3.00 to 95.4%. Thus it can be affirmed that the analytical method developed in this study can be used with selectivity, specificity, precision and accuracy in both clinical studies for fluoxetine and trimethoprim determination and forensic studies for fluoxetine and haloperidol determination. Key-words: nanoLC-MS. HF-LPME. Pharmaceutical drugs.110 p. : il. (algumas color.).application/pdfFármacosFarmacologiaQuímicaMicroextração em fase líquida com fibra oca para determinação de fármacos em plasma humano por nanoLC-MSinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - BEATRIZ ISABELLA CESTARO.pdfapplication/pdf10053703https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/61897/1/R%20-%20D%20-%20BEATRIZ%20ISABELLA%20CESTARO.pdf33c37e90395918c52798791c99baaae1MD51open access1884/618972019-08-08 18:37:16.502open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/61897Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082019-08-08T21:37:16Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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