Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bettencourt, Gisela Manuela de França
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/43353
Resumo: Orientador : Dr. Carlos Ricardo Soccol
id UFPR_ad862f8bd7ad476ceef9fbf4171a45bc
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/43353
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Goldbach, Juliana DegenhardtUniversidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e BiotecnologiaSoccol, Carlos Ricardo, 1953-Bettencourt, Gisela Manuela de França2024-04-19T18:22:27Z2024-04-19T18:22:27Z2016https://hdl.handle.net/1884/43353Orientador : Dr. Carlos Ricardo SoccolCoorientador: Dra. Juliana Degenhardt-GoldbachDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 23/02/2016Inclui referências : f.43-48;70-75;98-103Área de concentração: Saúde humana e animalResumo: Este trabalho teve por objetivos desenvolver um protocolo de regeneração por organogênese indireta e um protocolo de transformação genética para o clone BRS07-01 de E. urophylla, além de identificar e caraterizar uma bactéria endofítica isolada deste clone e avaliar sua interação com a Agrobacterium tumefaciens. Com relação a organogênese, a melhor taxa de regeneração (85.6%) foi observada quando os explantes foram primeiramente cultivados em meio de indução de calos WPM suplementado com 0.5 ?M de TDZ e 0.5 ?M de ANA e em seguida transferidos para o meio de indução de brotos com 5.0 ?M de BAP e 1.0 ?M de ANA. Após a regeneração dos brotos, a melhor taxa de enraizamento (84.0%) foi obtida em meio suplementado com 14.7 ?M de IBA. Com base na avaliação de 56 marcadores RAPD não foi observada variação somaclonal durante as fases da organogênese. Dois agentes seletivos foram testados para aumentar a eficiência de seleção, canamicina e geneticina, e a concentração mínima de 50 mgL-1 de canamicina foi selecionada para a transformação genética. Para o desenvolvimento de protocolo de transformação genética, vários fatores foram avaliados como dias de pré e co-cultivo, presença de Acetosyringona (AS), concentrações de agentes seletivos, tipo de explantes e tempo de sonificação. Quando usado o explante foliar, a maior eficiência de transformação genética (TE) foi de 2.67%, utilizando 50 ?M de AS no co-cultivo líquido e 100 ?M de AS no co-cultivo sólido. Entretanto, a maior TE de 20.83% foi observada com brotações como explantes submetidos a 2 min de sonificação e co-cultivados com 100 ?M de AS e selecionados em meio com 150 mgL-1 de Canamicina. Durante os experimentos, observamos a presença de bactérias endofíticas. Após isoladas, com base na análise filogenética, dois isolados foram identificados como Stenotrophomonas maltophilia, uma bactéria gramnegativa com sensibilidade a diferentes antibiótiocos, capaz de formar biofilme e sintetizar a auxina ácido indol-acético, que pode estar interferindo no processo e nos resultados de transformação genética.Abstract: This work aimed to develop an indirect organogenesis and a genetic transformation protocol for clone BRS07-01 of E. urophylla, as well as to isolate and characterize endophytic bacteria from this clone, which could be interfering in the Agrobacterium tumefaciens infection process during transformation of the clone. Regarding the organogenesis, the results showed that higher regeneration rate (85.6%) was observed when the leaves explants were first cultured on callus induction medium WPM supplemented with 0.5 ?M of TDZ and 0.5 ?M of NAA and then transferred to the shot induction medium with 5.0 ?M of BAP and 1.0 ?M NAA. The best adventitious root formation (80.0%) was observed when plantlets were cultured on medium supplemented with 14.7 ?M IBA. Based on 56 RAPD molecular markers we did not observe somaclonal variation during the organogenesis process. Two selective agents, kanamycin and geneticin, were tested to determine the best antibiotic and concentration for genetic transformation. Kanamycin at 50 mgL-1 showed to be the most effective. For genetic transformation, several factors were evaluated, as days on pre and co-culture, Acetosyringone (AS), concentrations of selective agents, explants type and sonication time. For leaf explants, higher transformation efficiency (TE) was 2.67% when the medium was supplemented with 50 ?M of AS on liquid co-culture and 100 ?M of AS on solid co-culture. However, the highest TE (20.83%) was observed when with microshoots were used as explants and they were submitted to 2 min of sonication, co-cultured with 100 ?M of AS and selected on medium with 150 mgL-1 of Kanamycin. Two isolates endophytic bacteria could be isolated and characterized as Stenotrophomonas maltophilia. This gramnegative bacteria, showed sensibility to different antibiotics and was able to form biofilm and synthetize the auxin indolacetic acid. For these reasons, we suggest that this endophytic can somehow be interfering in the genetic transformation of the BRS07-01 clone.105 f. : il. algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalEnzimas - BiotecnologiaIndirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropyllainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - GISELA MANUELA DE FRANCA BETTENCOURT.pdfapplication/pdf2634985https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/1/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf86b49265cbae6282255ff35c6a3386a6MD51open accessTEXTR - D - GISELA MANUELA DE FRANCA BETTENCOURT.pdf.txtExtracted Texttext/plain198096https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/2/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf.txt13b3ed1b70bca5818ff1c54c3a61598dMD52open accessTHUMBNAILR - D - GISELA MANUELA DE FRANCA BETTENCOURT.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1517https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/3/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf.jpge14a343a296e4c98377ca5d914fb8f17MD53open access1884/433532024-04-19 15:22:27.587open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/43353Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-04-19T18:22:27Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
title Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
spellingShingle Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
Bettencourt, Gisela Manuela de França
Enzimas - Biotecnologia
title_short Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
title_full Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
title_fullStr Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
title_full_unstemmed Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
title_sort Indirect organogenesis and genetic transformation protocol development for an elite clone of E.uropylla
author Bettencourt, Gisela Manuela de França
author_facet Bettencourt, Gisela Manuela de França
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Goldbach, Juliana Degenhardt
Universidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Soccol, Carlos Ricardo, 1953-
dc.contributor.author.fl_str_mv Bettencourt, Gisela Manuela de França
contributor_str_mv Soccol, Carlos Ricardo, 1953-
dc.subject.por.fl_str_mv Enzimas - Biotecnologia
topic Enzimas - Biotecnologia
description Orientador : Dr. Carlos Ricardo Soccol
publishDate 2016
dc.date.issued.fl_str_mv 2016
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2024-04-19T18:22:27Z
dc.date.available.fl_str_mv 2024-04-19T18:22:27Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/43353
url https://hdl.handle.net/1884/43353
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 105 f. : il. algumas color.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/1/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/2/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43353/3/R%20-%20D%20-%20GISELA%20MANUELA%20DE%20FRANCA%20BETTENCOURT.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv 86b49265cbae6282255ff35c6a3386a6
13b3ed1b70bca5818ff1c54c3a61598d
e14a343a296e4c98377ca5d914fb8f17
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898831505391616

Registros relacionados