Estudo comparativo entre as técnicas fotocolorimétrica (utilizando o reativo de Ehrlich) e fluorimétrica (utilizando a fluorescamina em cromatografia líquida de alta pressão) na determinação da taxa de hidroxiprolina a partir de amostras teciduais hidratadas e desidratadas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Dietz, Ulrich Andreas
Data de Publicação: 1995
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/8481
Resumo: Orientador: Nicolau Gregori Czeczko
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spelling Repka, João Carlos DominguesUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da SaúdeCzeczko, Nicolau GregoriDietz, Ulrich Andreas2022-12-14T19:25:09Z2022-12-14T19:25:09Z1995https://hdl.handle.net/1884/8481Orientador: Nicolau Gregori CzeczkoCo-orientador: João Carlos Domingues RepkaTese (doutorado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias da SaudeResumo: O presente estudo objetiva avaliar, comparativamente, as técnicas fotocolorimétrica e fluorimétrica, na determinação da taxa de hidroxiprolina encontrada em hidrolisados protéicos a partir de amostras teciduais não cicatriciais. A técnica fotocolorimétrica utilizada foi a proposta por IBBOTT (1974).. A técnica fluorimétrica adotada foi descrita por FELIX, TOOME e DeBERNARDO (1975) e adaptada para as condições do Laboratório do Instituto de Tecnologia do Paraná. O procedimento experimental constou da retirada e armazenamento de fragmentos teciduais de duodeno, jejuno e colo descendente de dois cães. As amostras teciduais foram pesadas e a metade delas submetida à desidratação em estufa a 80ºC. Em seguida, as amostras teciduais hidratadas e desidratadas foram submetidas à hidrólise ácida, sendo que em seguida, os hidrolisados teciduais foram processadas bioquimicamente para a determinação da taxa de hidroxiprolina tecidual conforme duas técnicas distintas: a primeira, fotocolorimétrica (utilizando o reativo de Ehrlich e análise em leitor de microplacas) e a segunda, fluorimétrica (mediante descarboxilação oxidativa com N-clorosuccinamida e uso de fluorescamina em cromatografia líquida de alta pressão). A análise dos resultados obtidos a partir das soluções-padrão de trabalho de hidroxiprolina apresentou a correlação r=0,9970 na técnica fotocolorimétrica e r=0,9962 na técnica fluorimétrica. A taxa de hidroxiprolina média encontrada na técnica fotocolorimétrica foi de 3,303 mg/g de tecido para as amostras hidratadas e de 12,193 mg/g de tecido para as amostras desidratadas; na técnica fluorimétrica, estas taxas foram de 4,217 mg/g de tecido e 12,018 mg/g de tecido, respectivamente. Nas amostras processadas como pool pela técnica fotocolorimétrica, a taxa de hidroxiprolina tecidual foi de 3,889 mg/g de tecido nas amostras hidratadas e de 12,500 mg/g de tecido nas amostras desidratadas; na técnica fluorimétrica estes resultados formam 2,622 mg/g de tecido e 13,500 mg/g de tecido, respectivamente. Não houve diferença significante entre estes resultados. Ambas as técnicas apresentaram tempo de processamento em laboratório semelhante. Finalmente, a análise regressiva dos dados permite dizer que há uma correlação entre a taxa de hidratação ou desidratação de uma amostra tecidual e a taxa de hidroxiprolina tecidual encontrada em ambos os estados, em função da variação de peso da amostra, como demonstrado pelo índice de Correlação (102,26%); por outro lado, índices regressivos não permitem que se realize a extrapolação de resultados esperados, sinalizando a importância da determinação individual dos valores.Abstract: The aim of the present study was to compare two different biochemical techniques in determining the tissue hydroxyprolin rate. The photocolorimetric technique used was the one described by IBBOTT (1974). The fluorimetric technique used was proposed by FELIX, TOOME and DeBERNARDO (1975). The steps of the experiment were: a) Tissue samples of the duodenum, jejunum and colon descendens of dogs were obtained, dried with absorbent paper and weighed; half of the samples were submitted to dehydration in an oven (80°C) and had their dry weight determined, b) The wet and dry samples were hydrolized with HCl and equivalent volumes of the hydrolisates were submitted to both of the biochemical techniques. In the photocolorimetric technique the steps involved the oxidation with chloramine-T and final color reaction with Ehrlich’s reagent. In the fluorimetric technique hydroxyprolin was decarboxilized with N-chlorosuccinimide, the pre-column derivatization was realized with fluorescamine and the final determination of the fluorescence done with high pressure liquid chromatography. The high sensibility of both techniques was demonstrated by the correlation rate obtained within the hydroxyprolin standards (r=0.9970 and 0.9962, respectively). In the photocolorimetric technique the mean hydroxyprolin rate was 3.303 mg/g for the wet and 12.193 mg/g for the dry samples; in the fluorimetric technique the rates were 4.217 mg/g and 12.018 mg/g, respectively. The tissue hydroxyprolin rate obtained by the pool of all the samples was 3.889 mg/g for the wet and 12.500 mg/g for the dry samples in the photocolorimetric technique and 2.622 mg/g and 13.500 mg/g, respectively, in the fluorimetric technique. Regarding the final results, there was no difference between both biochemical techniques. Finally, the regressive analysis shows first, a proportion between the rate of hydration of the samples and the tissue hydroxyprolin rate (correlation index = 102,26%), and second, outlines that it is important to determine the individual tissue hydroxyprolin rates of the samples.98f. : grafs., tabs. ; 29cm.application/pdfDisponível em formato digitalFluorometriaFluorescaminaCromatografia liquida de alta pressãoHidroxiprolinaTesesEstudo comparativo entre as técnicas fotocolorimétrica (utilizando o reativo de Ehrlich) e fluorimétrica (utilizando a fluorescamina em cromatografia líquida de alta pressão) na determinação da taxa de hidroxiprolina a partir de amostras teciduais hidratadas e desidratadasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALULRICH ANDREAS DIETZ_1995.pdfapplication/pdf27302881https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/8481/1/ULRICH%20ANDREAS%20DIETZ_1995.pdf2362eda98012d5c893aa6eed346723acMD51open accessTEXTULRICH ANDREAS DIETZ_1995.pdf.txtExtracted Texttext/plain196527https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/8481/2/ULRICH%20ANDREAS%20DIETZ_1995.pdf.txtc390f12295cf87c7b7a4b889f68668f3MD52open accessTHUMBNAILULRICH ANDREAS DIETZ_1995.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1421https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/8481/3/ULRICH%20ANDREAS%20DIETZ_1995.pdf.jpg6bcca6d62fcc82cb50b3712387a28689MD53open access1884/84812022-12-14 16:25:09.689open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/8481Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-12-14T19:25:09Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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