Estudo molecular de Cepas de Leishmania (L.) Infantum Chagasi isoladas de Flebotomíneos Lu. Longipalpis de área endêmica de Leishmaniose visceral da Amazônia Brasileira

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lidani, Kárita Cláudia Freitas
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/32221
Resumo: Orientadora: Profª Drª Iara de Messias Reason
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spelling Lidani, Kárita Cláudia FreitasMessias, Iara José Taborda de, 1958-Ishikawa Edna Aoba YassuiUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna2019-02-04T12:58:58Z2019-02-04T12:58:58Z2011https://hdl.handle.net/1884/32221Orientadora: Profª Drª Iara de Messias ReasonCo-orientadora: Profª Drª Edna Aoba Yassui IshikawaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa: Curitiba, 17/06/2011Bibliografia: fls.56-67Área de concetração em doenças infecciosasResumo: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença endêmica em vários estados do Brasil. O agente etiológico é o protozoário Leishmania (L.) infantum chagasi e o principal vetor é o flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. Estudos epidemiológicos têm utilizado a PCR convencional para mensurar a taxa de infecção de flebotomíneos, como estratégia para aumentar a sensibilidade diagnóstica. Entre as principais vantagens deste método destaca-se a sensibilidade e especificidade, independente do número, estágio e localização de Leishmania no trato digestivo do vetor. Nesse sentido, o presente trabalho objetivou comparar genes com diferentes números de cópias para detectar L. chagasi em área endêmica para LV da Amazônia oriental, no município de Barcarena, estado do Pará. Foram realizadas capturas de 280 fêmeas de flebotomíneos Lu. longipalpis utilizando armadilhas de luz tipo CDC, no período de novembro de 2003 a fevereiro de 2004. O DNA foi extraído a partir do inseto inteiro, sem dissecção prévia, utilizando SDS e KOAc e empregado em reações de PCR para os genes de Leishmania: mini-exon, DNA do cinetoplasto (kDNA) e subunidade ribossomal 18S (SSU-rRNA). Foram empregados os seguintes iniciadores: D1 (5'-CCAGTTTCCCGCCCCG-3') e D2 (5'-GGGGTTGGTGTAAAATAG-3') que amplificam 780pb do gene kDNA; R221 (5'-GGTTCCTTTCCTGATTTACG-3') e R332 (5'-GGCCGGTAAAGGCCGAATAG-3') que amplificam 600pb do gene da subunidade menor do ribossomo (SSU-rRNA); S1629 (5'-GGGAATTCAATAWAGTACAGAAACTG-3') e S1630 (5'-GGGAAGCTTCTGTACTWTATTGGTA-3') que amplificam 400pb do gene mini-exon. A amplificação do gene da subunidade 28S rRNA (Lu1- 5'-TGAGCTTGACTCTAGTTTGGCAC3' e Lu2 5'-AGATGTACCGCCCCAGTCAAA-3') de Lu. longipalpis foi utilizado como controle para a extração do DNA do vetor, amplificando um fragmento de aproximadamente 370pb. Do total de 280 amostras de fêmeas Lutzomyia longipalpis, 24 (8,6%) apresentaram resultados positivos para o gene kDNA; 20 (7,1%), para o gene mini-exon; e 15 (5,3%) para o gene SSU-rRNA. Assumindo o resultado da taxa de infecção natural para o kDNA, a sensibilidade dos testes para os genes mini-exon e SSU-rRNA foi de 83,3% e 63%, respectivamente. A taxa de infecção foi considerada elevada e preocupante, visto que 62,5% dos vetores infectados foram coletados no intradomicílio; 37,5%, no peridomicílio. Os dados demonstram a importância da PCR como ferramenta para investigação da epidemiologia molecular da leishmaniose visceral para a estimativa de risco de transmissão da doença em área endêmica, com maior confiabilidade para o uso do DNA do cinetoplasto do parasita como marcador.Abstract: Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic disease in the majority of states in Brazil. The causative agent of VL the protozoan Leishmania (L.) infantum chagasi and the main vector the sandfly Lutzomyia longipalpis. Epidemiological studies have used conventional PCR to measure the ratio of sandfly infection as a strategy to increase the sensitivity of VL diagnosis. The main advantage of this method is the sensitivity and specificity, regardless of number, stage and location of Leishmania in the digestive tract of the vector. The aim of the present study was to compare genes with different numbers of copies to detect L. (L.) i. chagasi in an endemic area for VL in Oriental Amazon, in Barcarena, Pará State. A total of 280 Lu. longipalpis female phlebotomine were captured using CDC light traps, from november 2003 to february 2004. The DNA was extracted from the whole insect (no dissected), using SDS and KOAc. PCR for the genes mini-exon, kinetoplast DNA (kDNA) and 18S ribosomal subunit (SSU-rRNA) of Leishmania was used. The following primers were utilized: D1 (5'-CCAGTTTCCCGCCCCG-3') and D2 (5'-GGGGTTGGTGTAAAATAG-3 ') that amplify kDNA gene 780bp; R221 (5'-GGTTCCTTTCCTGATTTACG-3 ') and R332 (5'-GGCCGGTAAAGGCCGAATAG-3') that amplify 600bp of the gene of the ribosomal small subunit (SSU-rRNA); S1629 (5'-GGGAATTCAATAWAGTACAGAAACTG-3 ') and S1630 (5'-GGGAAGCTTCTGTACTWTATTGGTA-3') that amplify the 400bp mini-exon gene. The 28S rRNA gene amplification LU1 (5'-TGAGCTTGACTCTAGTTTGGCAC-3') and LU2 (5'-AGATGTACCGCCCCAGTCAAA-3') of Lu. longipalpis was used as control for extraction of vectors with amplifies a fragment of approximately 370bp. In a total of 280 samples of Lu. Longipalpis females, 24 (8.6%) were positive for the gene kDNA; 20 (7.1%) for the mini-exon gene, and 15 (5.3%) for the SSU-rRNA gene. Assuming the result of natural infection rate for the kDNA, the sensitivity of the tests for the mini-exon and SSU-rRNA genes were 83.3% and 63%, respectively. The infection rate was high and concerning, given that 62.5% of infected vectors were collected intra-household, and 37.5% in the peridomicile. These data show the importance of PCR as a tool for investigating the molecular epidemiology of VL for estimating the risk of disease transmission in endemic areas, with kinetoplast DNA showing better reliability as a marker for the parasite.67f. : il. [algumas color.], grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalTesesLeishmaniose visceralLeishmaniaFlebotomineoLeishmania infantumClínica médicaEstudo molecular de Cepas de Leishmania (L.) Infantum Chagasi isoladas de Flebotomíneos Lu. Longipalpis de área endêmica de Leishmaniose visceral da Amazônia Brasileirainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - KARITA CLAUDIA FREITAS LIDANI.pdfapplication/pdf1675299https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/32221/1/R%20-%20D%20-%20KARITA%20CLAUDIA%20FREITAS%20LIDANI.pdff9437f95cb9e8778d5c87f93ab2ad741MD51open access1884/322212019-02-04 10:58:58.118open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/32221Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082019-02-04T12:58:58Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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