Identificação de Brachyspira spp. em cecos de frangos de corte por meio de histologia e marcação in situ

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Matos, Monica Regina de, 1991-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/61407
Resumo: Orientadora: Prof.a Dra. Aline de Marco Viott
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spelling Matos, Monica Regina de, 1991-Viott, Aline de Marco, 1981-Universidade Federal do Paraná. Setor Palotina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal2021-05-27T18:02:42Z2021-05-27T18:02:42Z2019https://hdl.handle.net/1884/61407Orientadora: Prof.a Dra. Aline de Marco ViottDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa : Palotina, 25/02/2019Inclui referênciasÁrea de concentração: Saúde animalResumo: O gênero Brachyspira corresponde ao grupo de bactérias anteriormente classificadas no gênero Serpulina e inclui várias espiroquetas intestinais comensais e patogênicas para suínos, aves, outras espécies animais e para o homem. Em aves, algumas espécies patogênicas desse gênero causam uma condição conhecida como espiroquetose intestinal aviária, causando sérias perdas econômicas atualmente ainda sub diagnosticadas. A Brachyspira possui característica de ser fastidiosa ao crescimento. Devido a isso o emprego de técnicas de identificação rápidas e eficazes se fazem necessárias. O objetivo deste estudo foi identificar Brachyspira spp. através das técnicas de histologia, imuno-histoquímica (IHQ) e hibridização fluorescente in situ (FISH) em amostras de ceco de aves de corte comercial fixadas em formol. Foram coletadas amostras de 129 aves com idade entre 35 e 45 dias de vida oriundas de granjas de frango de corte comercial. Para avaliação, fragmentos de ceco fixadas em formol a 10% foram incluídas em parafina cortadas a cinco micrômeros de espessura em lâminas silanizadas para técnicas de FISH e IHQ e lâminas de vidro comum para processamento da histologia de rotina (H&E) e coloração de PAS (ácido periódico de Schiff). Na H&E as lesões histológicas foram analisadas e graduadas. Na PAS, foram contabilizadas as células caliciformes e comparadas entre amostras positivas e negativas para FISH e IHQ. Para técnica de FISH foram utilizadas sondas marcadas de, B, pilosicoli, B. hyodysenteriae e B. intermedia e para IHQ anticorpo policlonal de coelho específico para o gênero Brachyspira. Das 129 amostras, 82 obtiveram marcação positiva para IHQ e 86 foram positivas para técnica de FISH. As amostras positivas para o gênero Brachyspira na técnica de FISH foram testadas para as espécies B. pilosicoli, B. hyodysenteriae e B. intermedia, nos quais 56 foram positivas para B. pilosicoli, 75 para B. hyodysenteriae e 80 para B. intermedia. Em 82 amostras houve infecção mista por mais de uma espécie testada. Houve aumento de células caliciformes nas amostras positivas para FISH e IHQ. As técnicas utilizadas se apresentaram eficazes e Inter correspondentes na identificação das Brachyspiras avaliadas servindo assim como uma ferramenta rápida e eficiente para o diagnóstico. Palavras-chave: Espiroquetose intestinal aviária. Imuno-histoquímica. Hibridização fluorescente in situ.Abstract: Genus Brachyspira corresponds to a group of bacteria previously classified into genus Serpulina and includes several commensal and pathogenic intestinal spirochetes that affects swine, poultry, and other animal species including humans. In poultry, some pathogenic species of this genus cause a disease known as avian intestinal spirochetosis, leading to severe losses that are still sub-diagnosed. Brachyspira has the characteristic of fastidious growth. Because of that, application of fast and efficient identification techniques are necessary. The objective of this study was to identify Brachyspira spp. using histology, immunohistochemistry (IHC) and fluorescent in situ hybridization (FISH) techniques in formalin-fixed samples of cecum from broiler chickens. Samples were collected from 129 broiler chickens aged between 35 and 45 days old. To evaluate, 10% formalin fixed fragments of cecum were included in paraffin and sectioned in five microns on previously silanized slides for FISH and IHC techniques and common glass slides for routine histology processing and PAS staining (periodic acid of Schiff). In H&E the histological lesions were analyzed and graded (in 5 hpf). In PAS, the goblet cells were counted (in 10 hpf) and compared with positive and negative samples in FISH and IHC. Were used labeled probes to B. spp, B. pilosicoli, B. hyodysenteriae, and B. intermedia for the FISH technique and specific B. spp. polyclonal rabbit antibody for IHC. Of the 129 samples, 82 were positive in IHC and 86 were positive in FISH. Samples with positive Brachyspira specimens in the FISH technique were tested for B. pilosicoli, B. hyodysenteriae and B. intermedia, in which 56 samples were B. pilosicoli positive, 75 were B. hyodysenteriae positive, and 80 were B. intermedia positive. In 82 samples there was mixed infection by more than one species tested. The used techniques were effective and inter-corresponding to identify these Brachyspiras species, thus serving as a fast and efficient tool for diagnosis. Key w ord s: Avian intestinal spirochetosis. immunohistochemistry. Fluorescent in situ hybridization.38 p. : il. (algumas color.).application/pdfImunohistoquimicaHibridizaçãoEspiroquetose intestinal aviáriaIdentificação de Brachyspira spp. em cecos de frangos de corte por meio de histologia e marcação in situinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - MONICA REGINA DE MATOS.pdfapplication/pdf9428491https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/61407/1/R%20-%20D%20-%20MONICA%20REGINA%20DE%20MATOS.pdf0ee9a80872370ca28838429654689282MD51open access1884/614072021-05-27 15:02:43.026open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/61407Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-05-27T18:02:43Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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