Caracterização química e atividade anti-inflamatória do extrato hidroalcoólico de semente de Persea americana Mill, Lauraceae

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Soares, Fernanda Saad
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/63211
Resumo: Orientadora: Profª. Drª. Iara J. de T. Messias-Reason
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spelling Santos, Thalita Gilda, 1986-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasMessias, Iara José Taborda de, 1958-Soares, Fernanda Saad2024-02-08T15:36:33Z2024-02-08T15:36:33Z2019https://hdl.handle.net/1884/63211Orientadora: Profª. Drª. Iara J. de T. Messias-ReasonCoorientadora: Profª. Drª. Thalita Gilda SantosDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa : Curitiba, 30/04/2019Inclui referências: p.119-138Resumo: A espécie Persea americana Mill. (Lauraceae) popularmente conhecida como abacateiro tem aplicação diversa na etnomedicina, sendo o extrato hidroalcoólico da semente utilizado em fricções externas contra reumatismo e dores articulares. Este trabalho tem como objetivo realizar a caracterização química do extrato hidroalcoólico da semente de P. americana e avaliar seu potencial anti-inflamatório em macrófagos. Extratos de sementes coletadas em Curitiba-PR e Rosário do Ivaí-PR foram analisados a partir de um planejamento fatorial 23, em períodos de maturação (maduro e imaturo), granulometria (pó finíssimo, semi fino e grosso), grau alcoólico (30%,50% e 70% (v/v)) e tempo de maceração (24h, 72h e 168h) distintos, a fim de avaliar a influência destes fatores na composição química e atividade biológica dos extratos. O perfil cromatográfico do extrato hidroalcoólico 70% (v/v) foi determinado por CLAEDAD e 46 substâncias foram identificadas por CLUE-ESI-QToF-EM nos modos positivo e negativo de ionização. Através da análise quimiométrica por Análise de Componentes Principais (ACP) discriminou os extratos, preparados nas condições especificadas no planejamento fatorial, por região de coleta e grau alcoólico, sendo os extratos preparados em álcool etílico 50% e 70% (v/v) agrupados e discriminados dos extratos preparados com álcool etílico 30% (v/v). Para investigação do potencial biológico, foram analisados os extratos de sementes maduras e imaturas das duas regiões de coleta e em 3 condições do planejamento fatorial: (1) álcool etílico 70% (v/v), pó finíssimo, 24h de maceração, (8) álcool etílico 30% (v/v), pó grosso, 168h de maceração e (9) álcool etílico 30% (v/v), pó semifino, 72h de maceração, quanto a sua citotoxicidade através do método de Redução do sal de Tetrazólio (MTT), e atividade sobre a produção de óxido nítrico por método de Griess e citocinas inflamatórias por método de ELISA, em macrófagos murinos (RAW 264.7) estimulados com 2,5 ?g/mL de lipopolissacarídeo (LPS). Os extratos da condição (1) de sementes coletadas em Rosário do Ivaí não tiveram atividade significativa sobre a produção de óxido nítrico, entretanto os extratos de sementes coletadas em Curitiba que apresentaram atividade significativa (p<0,05). Os extratos das sementes provenientes das duas regiões, nas condições (8) e (9) também apresentaram atividade significativa (p<0,01). Entretanto, analisando-se a atividade dos mesmos extratos sobre a produção de citocinas antiinflamatória (IL-10) e pró-inflamatórias (KC e IL-6), nenhum apresentou atividade significativa. O método para perfil cromatográfico, a identificação das substâncias dos extratos, bem como a atividade sobre a produção do óxido nítrico por macrófagos indicam que a granulometria do pó e o tempo de maceração não influenciam na diferenciação dos extratos, porém o grau alcoólico discrimina os extratos quimicamente e biologicamente, sendo os extratos produzidos com álcool etílico 70% e 50% (v/v) semelhantes enquanto discriminados dos extratos produzidos com álcool etílico 30% (v/v). Desta forma, verifica-se que as sementes de P. americana utilizadas popularmente e atualmente consideradas sub-produto e produto de descarte, apresentam-se como fonte de substâncias bioativas com potencial anti-inflamatório. Palavras-chave: Persea americana. Cromatografia Líquida de Alta Pressão. Espectrometria de massas. Análise de componente principal. Macrófagos.Abstract: The Persea americana Mill. (Lauraceae) specie is popularly known as avocado tree and it shows many applications in the ethnomedicine. The hydroethanolic extract produced from the seeds is used externally to treat rheumatism and articular pain. The aim of the present study is to chemically characterize the hydroethanolic extract of the P. americana seeds and to investigate its anti-inflammatory potential over macrophages cells. The extracts of the seeds collected in Curitiba-PR and Rosário do Ivaí-PR were analyzed following a 23 factorial design, in different maturation state (ripe and unripe), particle size (fine powder, medium powder and coarse powder), ethyl alcohol concentration (30%, 50% and 70% (v/v)) and maceration time (24h, 72h and 168h), in order to evaluate the influence of these factors on the chemical composition and biological activity of the extracts. The chromatographic profile of hydroalcoholic extract 70% (v/v) was determined by HPLC-DAD and 46 substances were identified by UPLC-ESI-QToF-MS in positive and negative ionization mode. The chemometric analysis by Principal Component Analysis (PCA) discriminated the extracts prepared under the conditions specified in the factorial design, by location and alcohol concentration. The extracts prepared by ethyl alcohol 50% and 70% (v/v) were grouped and discriminated from extracts prepared with ethyl alcohol 30% (v/v). To investigate the biological potential, the extracts of ripe and unripe seeds from the two locations were analyzed in three conditions of the factorial design: (1) ethyl alcohol 70% (v/v), fine powder, 24h maceration, (8) 30% (v/v) ethyl alcohol, coarse powder, 168h maceration, and (9) 30% (v/v) ethyl alcohol, medium powder, 72h maceration. It was analyzed the cytotoxicity by the Reduction of Tetrazolium Salt (MTT), and the activity on the production of nitric oxide by Griess method and inflammatory cytokines by ELISA in murine macrophages (RAW 264.7) stimulated with 2.5 ?g/mL of lipopolysaccharide (LPS). Extracts from the condition (1) of seeds collected in Rosário do Ivaí did not show significant activity on the production of nitric oxide, however the seed extracts collected in Curitiba showed significant activity (p <0.05). Seed extracts from the two location under conditions (8) and (9) also showed significant activity (p <0.01). However, analyzing the activity of the same extracts on the production of antiinflammatory (IL-10) and pro-inflammatory cytokines (KC and IL-6), none showed significant activity. The method for chromatographic profile, the identification of extract substances as well as the activity on the production of nitric oxide by macrophages indicate that the particle size and the time of maceration does not influence the differentiation of the extracts while the ethyl alcohol concentration discriminates the extracts chemically and biologically; the extracts produced with ethyl alcohol 70% and 50% (v/v) act similarly however they act differently from the extracts produced with ethyl alcohol 30% (v/v). In this way, it was verified that the seeds of P. americana popularly used and currently considered an avocado by-product are the source of bioactive substances with anti-inflammatory potential. Keywords: Persea americana. Chromatography, High Pressure Liquid. Mass spectrometry. Principal Component Analysis. Macrophage.1 recurso online : PDF.application/pdfCromatografia liquida de alta pressãoEspectrometria de massaMacrofagosFarmáciaCaracterização química e atividade anti-inflamatória do extrato hidroalcoólico de semente de Persea americana Mill, Lauraceaeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - FERNANDA SAAD SOARES.pdfapplication/pdf5357202https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/63211/1/R%20-%20D%20-%20FERNANDA%20SAAD%20SOARES.pdfd83e22552fc0668c8802eb5fea198a25MD51open access1884/632112024-02-08 12:36:33.229open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/63211Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082024-02-08T15:36:33Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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