Análise estrutural e funcional da região gInBA de Azospirillum brasilense

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Castellen, Patrícia
Data de Publicação: 2005
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/2321
Resumo: Orientador : Fabio de Oliveira Pedrosa
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spelling Wassem, Roseli, 1972-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Pedrosa, Fabio O., 1947-Castellen, Patrícia2022-12-14T17:51:02Z2022-12-14T17:51:02Z2005https://hdl.handle.net/1884/2321Orientador : Fabio de Oliveira PedrosaCo-orientadora : Roseli WassemDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: A fixação biológica de nitrogênio é a redução do nitrogênio atmosférico a amônio, catalisado pela nitrogenase. O metabolismo de nitrogênio é controlado por um complexo sistema regulatório denominado ntr, do qual fazem parte as proteínas PII e glutamina sintetase (GS). Em Azospirillum brasilense, a proteína GlnB (produto do gene glnB) atua como sinalizador dos níveis intracelulares de amônio, controlando a atividade de NifA, a qual é responsável pela ativação dos genes envolvidos na síntese do complexo da nitrogenase. A GS, produto do gene glnA, participa do sistema de assimilação do nitrogênio fixado, catalisando a síntese de glutamina, utilizando como substrato glutamato e amônio. O operon glnBA de A. brasilense foi identificado no plasmídeo pAB441, que foi isolado a partir de uma biblioteca genômica. Em experimentos de complementação genética com estirpes NifC de A. brasilense (HM26, HM053 e HM210) realizados por Vitorino (2001), observou-se que a presença do plasmídeo pAB441 leva a uma repressão completa da nitrogenase nestes mutantes, tanto na presença quanto na ausência de amônio. Com o objetivo de identificar os genes responsáveis por tal efeito foi construída uma biblioteca genômica do plasmídeo pAB441. Os insertos dos clones foram sequenciados e a análise da seqüência permitiu a identificação de dezessete ORF's na região do inserto do plasmídeo pAB441. Regiões deste inserto, exceto a região central, entre os sítios de restrição SacI/PstI, foram sub-clonadas para determinar seu efeito sobre a atividade da nitrogenase dos mutantes HM. Estas clonagens foram feitas em vetor estável em A. brasilense e a atividade de nitrogenase foi determinada nos mutantes contendo tais plasmídeos. Uma vez que o fenótipo NifC dos mutantes pode ser decorrente de mutações nos genes glnBA, este operon foi parcialmente seqüenciado nestas linhagens. Nas linhagens HM26 e HM210 foi detectada uma transversão C?T que levou à troca de uma glicina por cisteína na GS destes mutantes. Na HM26 a troca de aminoácido ocorreu na posição 53, correspondente ao sítio de ligação a amônio da GS enquanto na HM210 a troca deu-se na posição 129, o sítio de coordenação de íons metálicos. Ambas as mutações podem ser responsáveis pela baixa atividade biossintética de GS observada nestes mutantes.98f. : il. algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalTesesBioquímicaNitrogênio - FixaçãoAzospirillum brasilenseAnálise estrutural e funcional da região gInBA de Azospirillum brasilenseinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - PATRICIA CASTELLEN.pdfapplication/pdf1021826https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/2321/1/R%20-%20D%20-%20PATRICIA%20CASTELLEN.pdfb2bb17509eb69f06f2ce13d7796a6094MD51open access1884/23212022-12-14 14:51:02.556open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/2321Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-12-14T17:51:02Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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