Análise metabolômica de macrófagos murinos da linhagem raw-blue estimulados por LPS

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Alves, Gabriele Luise Neves, 1986-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/66838
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Guilherme Lanzi Sassaki
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spelling Alves, Gabriele Luise Neves, 1986-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Sassaki, Guilherme Lanzi, 1975-2020-05-26T22:16:17Z2020-05-26T22:16:17Z2019https://hdl.handle.net/1884/66838Orientador: Prof. Dr. Guilherme Lanzi SassakiDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências – Bioquímica. Defesa : Curitiba, 01/11/2019Inclui referências: p. 48-54Resumo: A inflamação é uma resposta do sistema imunológico a infecções e lesões que, quando persistente, pode resultar em doenças como a aterosclerose e a artrite reumatoide. Durante o processo inflamatório, alterações metabólicas em células do sistema imunológico, como macrófagos, influenciam, não apenas a atividade e a função de algumas células ou de um tecido, mas todo o desfecho da resposta imunológica e da homeostase do organismo. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise metabolômica inédita da linhagem celular de macrófagos murinos RAW-Blue estimulada para a resposta inflamatória por lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano in vitro, em comparação a um grupo controle, não tratado, a fim de identificar biomarcadores inflamatórios celulares e secretados, e contribuir para estudos posteriores na área do imunometabolismo celular. A resposta inflamatória estimulada por 100 ng/mL de LPS foi confirmada por ensaios com reagente de Griess e QUANTI-Blue. Foram analisadas as frações hidrofílicas e hidrofóbicas das células RAW-Blue, além do sobrenadante e do meio de cultivo celular DMEM, por meio de técnicas homonucleares e heteronucleares de espectroscopia de ressonância magnética nuclear 1D e 2D. No total, nos grupos tratado e controle, foram identificados 60 metabólitos nas frações celulares hidrofílicas, 50 sinais nas frações celulares hidrofóbicas e 42 metabólitos no sobrenadante do cultivo celular. Na comparação entre as frações celulares hidrofílicas tratadas com LPS e o grupo controle foi possível identificar uma concentração maior do biomarcador próinflamatório itaconato no grupo sob estímulo por LPS. Não foi possível identificar diferenças significativas entre os grupos nas frações celulares hidrofóbicas e no sobrenadante do cultivo celular. A análise comparativa entre os compostos presentes no meio de cultivo celular DMEM e o sobrenadante das células RAWBlue tratadas e não tratadas com LPS foi coerente com informações do fabricante do meio de cultivo e o esperado para o metabolismo das células. Os resultados estão de acordo com o que foi descrito em estudos metabolômicos semelhantes realizados com outras linhagens celulares de mamíferos. Palavras-chave: Inflamação. RAW-Blue. RMN. Metabolômica. LPS. Itaconato. DMEM.Abstract: Inflammation is a response of the immune system to infections and lesions that, when persistent, can result in diseases such as atherosclerosis and rheumatoid arthritis. During the inflammatory process, metabolic changes in cells of the immune system, such as macrophages, influence not only the activity and function of some cells or tissue, but the overall outcome of the body's immune response and homeostasis. The aim of this study was to perform an unprecedented metabolomic analysis of the RAW-Blue murine macrophage cell line stimulated for the inflammatory response by bacterial lipopolysaccharide (LPS) in vitro, compared to an untreated control group, to identify cellular and secreted inflammatory biomarkers, and contribute to further studies in the area of cellular immunometabolism. The inflammatory response stimulated by 100 ng/mL of LPS was confirmed by Griess reagent and QUANTI-Blue assays. The hydrophilic and hydrophobic RAW-Blue cells fractions, as well as the supernatant and DMEM cell culture medium, were analyzed by homonuclear and heteronuclear 1D and 2D nuclear magnetic resonance spectroscopy techniques. In total, in the treated and control groups, 60 metabolites were identified in hydrophilic cell fractions, 50 signals in hydrophobic cell fractions and 42 metabolites in cell culture supernatant. By comparing the hydrophilic cell fractions treated with LPS and the control group it was possible to identify a higher concentration of the pro-inflammatory biomarker itaconate in the group under LPS stimulation. It was not possible to identify significant differences between groups in hydrophobic cell fractions and cell culture supernatant. The comparative analysis between the compounds present in the DMEM cell culture medium and the supernatant of the LPS-treated and untreated RAW-Blue cells was consistent with the culture medium manufacturer information and the expected cell metabolism. The results are in accordance with what has been described in similar metabolomic studies performed with other mammalian cell lines. Keywords: Inflammation. RAW-Blue. NMR. Metabolomics. LPS. Itaconate. DMEM.70 p. : il. (algumas color.).application/pdfInflamaçãoEspectroscopia de ressonância magnéticaCelulas - Cultura e meios de culturaBioquímicaAnálise metabolômica de macrófagos murinos da linhagem raw-blue estimulados por LPSinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - GABRIELE LUISE NEVES ALVES.pdfapplication/pdf1931204https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/66838/1/R%20-%20D%20-%20GABRIELE%20LUISE%20NEVES%20ALVES.pdfda6e1c7b2d2f0f125b375d33d23517c4MD51open access1884/668382020-05-26 19:16:17.811open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/66838Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082020-05-26T22:16:17Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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