Análise retrospectiva por PCR metilação específica de pacientes diagnosticados com síndrome do X-frágil pela metodologia de PCR convencional

• Autor(a) principal: Oliveira, Bruna Serrão de
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/187386
• topic: Síndrome do cromossomo x frágil; Reação em cadeia da polimerase; Metilação; Methylation; Fragile X syndrome; Trinucleotide; Expansion; PCR

A síndrome do X frágil é causada pela expansão da repetição de um trinucleotídeo CGG na região 5’ não traduzida do gene Fragile X Mental Retardation 1, mapeado no cromossomo Xq27.3. Indivíduos afetados apresentam a mutação plena, caracterizada por >200 repetições do trinucleotídeo CGG. Devido aos diversos aspectos moleculares envolvidos na síndrome do X frágil, o diagnóstico da doença envolve o emprego de uma combinação de diferentes métodos de análise, sendo necessária a padronização de métodos de triagem sensíveis, com alto rendimento e boa relação custo-benefício. O presente trabalho consistiu em analisar amostras de 28 indivíduos já diagnosticados com síndrome do X frágil no Serviço de Genética Médica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período de 2012 a 2015, pelo PCR convencional, empregando o método de PCR metilação-específica. Adicionalmente, 14 amostras de pacientes cujo resultado do PCR convencional foi negativo para a doença, foram submetidas a sequenciamento de Sanger, para determinar o número exato de repetições CGG. Dessas 14 amostras selecionadas para sequenciamento, 9 foram também analisadas através do sistema Agilent Tapestation 4200. Para 4 dessas amostras, dados obtidos previamente através do método Triplet-primed PCR estavam disponíveis. Dos 28 pacientes diagnosticados com síndrome do X frágil, 13 foram caracterizados como mosaicos, e um paciente foi reclassificado como pré-mutado. Das 14 amostras sequenciadas, apenas uma apresentou análise viável, as demais treze apresentaram leituras com background. Os resultados obtidos através do sistema Tapestation apresentaram resultados compatíveis com o padrão de corrida eletroforética em gel de agarose. A técnica de PCR-metilação específica pode ser associada à PCR convencional para proporcionar um diagnóstico mais acurado. A análise proposta neste trabalho será complementar à análise convencional já realizada na rotina do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e irá beneficiar os pacientes possibilitando um diagnóstico mais acurado.