Avaliação do sistema MALDI-TOF MS como ferramenta de triagem para a identificação e diferenciação do complexo Burkholderia cepacia

• Autor(a) principal: Berdichevski, Mayana Kieling Hernandez
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/220642
• topic: Complexo Burkholderia cepacia; Fibrose cística; Reação em cadeia da polimerase; Burkholderia cepacia complex; MALDI-TOF MS; Diagnosis; Polymerase Chain Reaction

As bactérias do Complexo Burkholderia cepacia (Bcc) estão comumente associadas à infecção no trato respiratório em pacientes com Fibrose Cística (CF). O tratamento das infecções por Bcc nesses pacientes é complexo e a infecção, em alguns casos, está relacionada a um mau prognóstico. De fato, a espécie Burkholderia cenocepacia, membro do Bcc, é frequentemente associada à pneumonia necrotizante. Portanto, a identificação precoce da B. cenocepacia pode favorecer o prognóstico dos pacientes com CF. No entanto, a identificação e diferenciação de membros do Bcc por métodos fenotípicos é difícil. Sendo assim, métodos moleculares são considerados o padrão ouro para a diferenciação dos membros, mas requerem um laboratório especializado e mão de obra qualificada. O uso da espectrometria de massa para a identificação de microrganismos como o sistema MALDI-TOF MS tem apresentado ótima acurácia para identificação das principais espécies bacterianas de importância clínica, embora a diferenciação de espécies de um mesmo complexo, como o Bcc, nem sempre seja possível. Tendo em vista a necessidade de agilidade diagnóstica, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho do sistema MALDI-TOF MS como método de identificação da Burkholderia cenocepacia e a diferenciar de outras espécies do Bcc. Um total de 53 colônias sugestivas de Bcc foram analisadas pelo sistema MALDI-TOF usando dois protocolos de extração de proteínas: (A) Método direto: as colônias foram transferidas para uma placa de MALDI-TOF e fixadas com 1μL de ácido fórmico 70%; (B) Extração em tubo: as colônias foram transferidas para um microtubo e adicionadas 900 μL de etanol à 100%; após centrifugação o etanol foi removido e o pellet foi misturado com 25 μL de ácido fórmico 70% e 25 μL de acetonitrila 70%. Um volume de 1 μL da mistura foi transferido para a placa alvo do MALDI-TOF. Após a fixação das colônias na placa, em ambos os métodos, foi adicionado 1uL de ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico e após submetidas à identificação no equipamento Microflex MALDI-TOF (Bruker ®). Paralelamente, todos os isolados foram submetidos ao diagnóstico molecular (PCR com primers específicos) para identificação de espécies pertencentes ao Bcc e diferenciação de B. cenocepacia no genomovar IIIA ou IIIB. O MALDITOF foi capaz de identificar 100% (53/53) em nível de gênero e 94,34% (51/53) em nível de espécie, usando ambos os métodos de extração de proteína (A) e (B), de acordo com a PCR. Embora ambas as extrações tenham apresentado resultados confiáveis, o método (A) é mais rápido e requer menos reagentes. O sistema MALDI-TOF foi capaz de identificar corretamente 38 dos 40 isolados identificados como B. cenocepacia pela técnica de PCR. O sistema MALDI-TOF (Bruker®), devido a sua praticidade e custo baixo, pode ser usado como metodologia para diferenciar as espécies de Bcc.