Caracterização da composição do lisado plaquetário

• Autor(a) principal: Rodrigues, Raul Marques
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/238894
• topic: Células-tronco mesenquimais; Plaquetas; Terapia baseada em transplante de células e tecidos; Proteômica : Métodos; Platelet lysate; Mesenchymal stem cells; Cellular therapy; Proteomics; Particles

A cultura de células in vitro utiliza diversas formulações de meios de cultura, os quais contém uma fonte de fatores de crescimento; o padrão ouro atualmente utilizado para essa finalidade é o soro fetal bovino (SFB). Entretanto, existem alternativas melhores que superam sua eficácia e limitações. O uso do suplemento lisado plaquetário (LP) humano como substituto do SFB na cultura de células-tronco mesenquimais (CTM) humanas, por exemplo, é particularmente importante pois elimina o risco de xenorreação em pacientes tratados com essas células, além de evitar a transmissão de zoonoses, como a encefalopatia espongiforme bovina. Diversas agências regulatórias como a Organização Mundial da Saúde solicitaram a não utilização de suplementos de origem animal na manipulação de produtos biológicos que têm como finalidade a terapia em humanos. Produzido a partir de bolsas de plaquetas humanas descartadas pelo banco de sangue devido ao prazo de validade, o lisado plaquetário é uma fonte alternativa de fatores de crescimento atualmente viável, sustentável e segura para cultivo celular. Ele promove crescimento acelerado de CTMs em especial, permitindo a obtenção de uma dose terapêutica em menos tempo, mantendo características celulares imunofenotípicas e diferenciativas. A análise do conteúdo desse suplemento, porém, carece de dados, já que ele é preparado in-house, com variações dependendo do protocolo utilizado, sendo muitos protegidos por patente. Sabe-se que a ativação e rompimento das plaquetas no processo de coagulação sanguínea promove a liberação de mais de trezentas moléculas intracelulares em grânulos heterogêneos para o sangue, orquestrando diversas funções fisiológicas, como regeneração tecidual e angiogênese. No Centro de Processamento Celular Avançado (CPCA) do Hospital de Clínicas de Porto Alegre é utilizada grande quantidade de LP para diversos ensaios clínicos. Este trabalho busca, portanto, caracterizar a composição desse produto por metodologias não convencionalmente descritas na literatura, ao passo em que permite futuras investigações sobre seu modo de ação. Através da dosagem de proteínas totais foi observado que o LP possui 49,57 ± 3,65 mg/mL, concentração significativamente maior que o SFB (30,54 ± 1,76 mg/mL); além disso, a análise proteômica por ontologia gênica e função proteica identificou proteínas relacionadas a proliferação, morfogênese, diferenciação, biossíntese, adesão e metabolismo celular, que estão sendo possivelmente metabolizadas ou recicladas pelas células. Ainda, foram detectadas proteínas responsáveis pela ligação e ativação dos fatores de crescimento TGF-β, HGF e IGF. Na análise de partículas por espalhamento dinâmico de luz observou-se a presença de um perfil heterogêneo e polidisperso de partículas, com dois padrões populacionais em 231 ± 96 d.nm com 61% de intensidade e em 30 ± 8 d.nm com 26% de intensidade; sendo possivelmente agregados proteicos ou distintas populações de vesículas, um importante meio de transporte de proteínas no microambiente celular. A realização de estudos como esse contribui essencialmente para a indústria biomédica, fornecendo dados para a melhor compreensão de diversos mecanismos moleculares envolvidos em terapia celular, impulsionando tecnologias na área da saúde e oferecendo alternativas melhores de tratamento para diversas patologias.