Virulência de lactobacilos da microbiota residual de dentina cariada

• Autor(a) principal: Soares, Vanessa Kern
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/78971
• topic: Cárie dentária; Dental caries; Dentin; Lactobacillus spp; Microbiology; Virulence factors

O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do selamento de lesões dentinárias de cárie sobre a virulência de Lactobacilos através da produção de ácido (P.A) e tolerância ácida (T.A). Pacientes (n=18) com lesões dentinárias foram submetidos à remoção parcial de tecido cariado e selamento da cavidade por 3 meses. Amostras de dentina foram obtidas antes e após o selamento. As amostras foram cultivadas em Ágar Rogosa, por 72 horas em anaerobiose. Até sete cepas de cada tipo morfológico foram selecionadas e armazenadas em caldo de Brain Heart Infusion (BHI) e glicerol em -20º C. As amostras foram analisadas quanto à coloração de Gram e morfologia. Somente bacilos e cocobacilos gram-positivos foram mantidos na amostra. Do total de 18 pacientes, somente seis apresentaram crescimento de Lactobacilos antes e após selamento. Nas análises de P.A e T.A foram avaliadas 66/62 cepas cultivadas antes e 75/74 cepas após o selamento, respectivamente. Para avaliação da produção de ácido, as cepas foram ressuspensas em 5 mL de caldo BHI e incubadas a 37º C, em anaerobiose durante 18 horas. Após lavagem, as cepas foram ressuspensas em caldo BHI, enriquecido com glicose a 1% a uma densidade óptica de 0,03 a 600 nm (DO600). As amostras foram incubadas a 37º C e alíquotas foram utilizadas para avaliação de pH em 9, 24, 48 e 72 horas, em triplicata. Um controle negativo foi incubado nas mesmas condições. As análises estatísticas foram realizadas nos diferentes períodos de avaliação (teste t- Student). Para realização do experimento de T.A, os isolados foram ressuspensos em 2 mL de caldo BHI e incubados a 37º C em anaerobiose durante 18 horas. Alíquotas foram ressuspensas em BHI caldo pH 7 e pH 4 a uma densidade óptica de 0,03 a 600 nm (DO600). Vinte e cinco microlitros das diluições 10-4 e 10-5 foram plaqueadas em BHI ágar no tempo 0 e após 30 minutos de incubação em anaerobiose a 37º C. Foi calculado a média±DP do número de UFC/mL do tempo 0 e após 30 minutos (pH 7 e pH 4). A taxa de crescimento durante 30 minutos foi comparada em cada grupo (pH 7 e pH 4 antes do selamento, pH 7 e pH 4 depois do selamento) (teste ANOVA). A produção de ácido (média±DP) dos Lactobacilos isolados antes e após o selamento, respectivamente, nos diferentes períodos de tempo foram: 9h (6,08±0,70-5,96±0,79 p=0,32), 24h (4,40±0,16- 4,37±0,15 p=0,26), 48h (4,21±0,12-4,21±0,15 p=0,87) e 72h (4,18±0,11-4,19±0,21 p=0,65). A taxa de crescimento antes do selamento no pH 7 foi de 1,770,32 log10 UFC/mL e após o selamento foi de 1,730,29 log10 UFC/mL (p=1.00). A taxa de crescimento antes do selamento no pH 4 foi de 1,670,37 log10 UFC/mL e depois do selamento foi de 1,600,34 log10 UFC/mL (p= 0.92). Não foi observado diferença na virulência de Lactobacilos antes e após o período de selamento utilizando a técnica de curva de pH e T.A.