Avaliação imunológica de proteínas recombinantes produzidas em linhagens de Escherichia coli produtora e não produtora de lipopolissacarídeos endotóxicos

• Autor(a) principal: Martello, Carolina Lumertz
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/183792
• topic: Proteínas recombinantes; Lipopolissacarídeos; Resposta imune

Organismos-modelo são amplamente utilizados na pesquisa como um recurso fácil e uniforme de fazer estudos. A bactéria Escherichia coli é o modelo procariótico universal, amplamente utilizado para a expressão de proteínas recombinantes. Entre os estudos que utilizam proteínas recombinantes se destacam estudos imunológicos, como avaliação da resposta imune desencadeada em animais. Mus musculus se apresenta como um modelo imunológico extensamente utilizado para mamíferos. Contudo, proteínas recombinantes expressas em E. coli apresentam contaminação por lipopolissacarídeos (LPS), moléculas presentes na membrana externa de bactérias gram-negativas, que atuam como potente endotoxinas e desencadeiam resposta imune celular em contato com o sistema imune de mamíferos. Metodologias de remoção de LPS podem ser alternativas para esse problema. A linhagem de E. coli ClearColi BL21 (DE3) (ClearColi) também se apresenta como alternativa por sintetizar um precursor do LPS, o lipídeo IVA, que possui um caráter endotóxico mais fraco em comparação ao LPS. O antígeno B de Echinococcus granulosus (EgAgB) é um oligômero composto de diversas subunidades e reconhecidamente antigênico, contudo, por possuir um centro lipofílico, apresenta dificuldade na avaliação da resposta imune celular que produz. O objetivo desse trabalho é avaliar a resposta imune celular desencadeada em esplenócitos de camundongos BALB/c estimulados com a subunidade recombinante rEgAgB8/2 de EgAgB produzida em uma linhagem de E. coli tradicionalmente utilizada e produtora de LPS, a BL21-CodonPlus (DE3)-RIL (RIL), e em ClearColi, produtora do lipídeo IVA, com e sem o tratamento para remoção de LPS. Os esplenócitos estimulados foram avaliados quanto à produção das citocinas IFN-, IL-10 e IL-4, sendo utilizados como controles positivos a proteína altamente imunogênica Concavalina A e LPS purificado e, como controle negativo, a falta de estímulo. As análises apontaram diferença significativa com p ≤ 0,05 da produção de IFN- e IL-10 na presença do controle positivo Concavalina A em comparação aos outros estímulos, e ausência da produção de IL-4. Portanto, não há diferença entre a resposta imune celular desencadeada pela subunidade rEgAgB8/2 produzida pela E. coli RIL ou ClearColi, assim como não houve diferença entre as subunidades que sofreram e que não sofreram tratamento para remoção de LPS. Esses resultados são explicados pelo fato do oligômero formado pela subunidade rEgAgB8/2 possuir um centro lipofílico, evitando a remoção eficaz de LPS ou do lipídeo IVA pelo tratamento utilizado. Novas análises utilizando uma proteína recombinante que não possua caráter lipofílico são necessárias para avaliar a eficácia do tratamento de remoção de LPS.