Análise da expressão do gene MK2 ao longo do processo de estabilização de Mesocestoides corti

• Autor(a) principal: Marques, Bárbara Machado
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/210256
• topic: Mesocestoides corti; Expressão gênica

Proteíno-quinases ativadas por mitógenos (MAPKs, de mitogen-activated protein kinases) são serino/treonino-proteíno-quinases que realizam a conversão de estímulos extracelulares em uma variedade de respostas celulares. MAPKs estão entre os componentes de algumas das principais e mais conservadas rotas de transdução de sinais que regulam muitos processos fisiológicos, incluindo a progressão do ciclo celular, a migração celular, a organização do citoesqueleto e o remodelamento da cromatina. Estudos moleculares envolvendo platelmintos da classe Cestoda têm demonstrado que as MAPKs possuem um papel fundamental no desenvolvimento destes organismos. Análises transcritômicas preliminares realizadas pelo nosso grupo, evidenciaram a expressão diferencial do gene que codifica uma proteína da família das MAPKs chamada MAPK-proteíno-quinase ativada (MK2) entre os estágios larval e adulto do cestódeo Mesocestoides corti, sugerindo seu possível envolvimento na regulação do desenvolvimento deste parasito. M. corti é uma espécie-modelo para o estudo da classe Cestoda, utilizado inclusive para a investigação do processo de diferenciação da larva (tetratirídeo) no verme adulto, chamado de estrobilização. Platelmintos cestódeos são agentes etiológicos de parasitoses importantes (cestodíases), tanto em seres humanos como em animais, causando doenças como a hidatidose e a cisticercose. Assim, o estudo de aspectos básicos da biologia destes parasitos é importante para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e controle de cestodíases. O objetivo geral deste trabalho é a investigação do possível envolvimento da MK2 de M. corti em uma rota de sinalização de MAPKs, que pode regular o processo de estrobilização deste parasito. A sequência codificadora da McMK2 foi amplificada por PCR e clonada por recombinação homóloga in vivo no vetor de expressão em pGEX-4T1-TEV. O plasmídeo recombinante construído foi então utilizado para a transformação genética de células de Escherichia coli BL21- CodonPlus-RP. As condições de expressão da McMK2 recombinante (rMcMK2) foram otimizadas e a proteína recombinante foi purificada para utilização na imunização de coelhos e produção de anticorpos policlonais monoespecíficos. Tais anticorpos serão posteriormente utilizados em experimentos de imunolocalização, para avaliação dos padrões de expressão espaciais e temporais da McMK2 em diferentes estágios do desenvolvimento estrobilar de M. corti. Os níveis de expressão do gene McMK2, codificador da McMK2, foram investigados por meio de RT-qPCR. Uma diminuição significativa na expressão do gene McMK2 foi observada no verme estrobilado, em comparação com a expressão em tetratirídeos, sugerindo que esta proteína pode estar envolvida com a regulação da estrobilização de M. corti.