Avaliação do efeito neuroprotetor da estimulação magnética estática em modelo in vitro da Doença de Parkinson

• Autor(a) principal: Stapenhorst, Martina Caroline
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/189063
• topic: Doença de Parkinson; Oxidopamina; Estimulação magnética transcraniana; Neuroblastoma; Linhagem celular; Neuroproteção; Parkinson’s Disease; Neuroprotection; 6-OHDA; Static Magnetic Stimulation; SH-SY5Y cells

Técnicas de estimulação magnética cerebral têm sido amplamente utilizadas no tratamento de doenças do sistema nervoso, como a doença de Parkinson (DP), mas seu real mecanismo de ação e efeito em modelos celulares carece de maiores investigações, principalmente no que concerne à DP. As limitações impostas pelos tratamentos farmacológicos têm colocado em foco estudos que avaliam neuroproteção sobre modelos celulares da doença, e a utilização de campos magnéticos estáticos para este fim não está descrita. Sendo assim, o objetivo principal deste trabalho foi investigar os efeitos neuroprotetores da Estimulação Magnética Estática (EME) em células de neuroblastoma humano SH-SY5Y diferenciadas com ácido retinoico (AR) com citotoxicidade induzida por 6-hidroxidopamina (6-OHDA). As células foram plaqueadas em placas de 24 poços a uma densidade de 5x104 células por poço e passaram pelo protocolo de diferenciação celular que utiliza 10μM de AR durante 7 dias. No dia 7, as células foram expostas à EME durante 24 horas em um suporte para placa de cultura com 6 ímãs cilíndricos NeFeB (neodímio-ferro-boro) a uma intensidade de 0,3 T e no dia 8 estas células foram tratadas com 15μM de 6-OHDA por 24 horas. No dia 9, foram avaliadas a viabilidade celular pelo ensaio de MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), a morte celular pela coloração com iodeto de propídeo (PI) e Hoescht_33342 (HO) e a densidade de neuritos emitidos pelas células diferenciadas através do plugin “Neurongrowth” do software ImageJ. Os grupos de tratamento foram divididos em: grupo controle; grupo 6-OHDA; grupo EME e grupo EME + 6-OHDA. O protocolo de diferenciação celular foi realizado com sucesso, sendo visualizada a projeção dos neuritos pelas células em análise de dia 7. O estabelecimento do modelo da DP in vitro por citotoxicidade com 6-OHDA foi confirmado através do ensaio de MTT, em que células que receberam a substância tiveram sua viabilidade diminuída (p<0,05) em comparação com as que não foram expostas. Foi observado um aumento na morte celular do grupo que foi exposto anteriormente à EME e posteriormente à 6-OHDA em comparação com o grupo que não sofreu o protocolo de estimulação magnética (p<0,05). A densidade de neuritos foi similar em todos os grupos de tratamento. Os resultados encontrados apontam para uma possível sensibilização das células à 6-OHDA quando a EME é aplicada previamente. Estes achados ilustram a importância de estudos que avaliam a utilização de campos magnéticos estáticos sobre modelos de células neuronais, principalmente no que diz respeito à intensidade do campo aplicado, ao tempo de exposição e ao momento em que a estimulação magnética é realizada. A realização de novos estudos que utilizem a técnica sob diferentes condições no modelo celular em questão é fundamental para a melhor compreensão de sua possível atividade neuroprotetora e também de seu mecanismo de ação.