Pesquisa de genes associados à virulência em cepas de Pasteurella multocida isoladas de cólera aviária nos Estados Unidos e avaliação do emprego de cartões FTA para o transporte do DNA bacteriano

• Main Author: Almeida, Camila Neves de
• Publication Date: 2015
• Format: Bachelor thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFRGS
• Download full: http://hdl.handle.net/10183/207539
• topic: Pasteurella multocida; Colera aviaria; Transporte biológico; Pasteurella multocida; Fowl cholera; FTA cards; Virulence genes

A Cólera Aviária (CA) é uma doença contagiosa causada pela bactéria Gram-negativa Pasteurella multocida. Ocorre geralmente de forma aguda e com altas taxas de morbidade e mortalidade. A severidade dos casos clínicos é em parte justificada pela presença de fatores de virulência que diferem os microrganismos. As principais estruturas associadas à virulência e identificadas em cepas de P. multocida são a cápsula e o lipopolissacarídeo. Entretanto, outros fatores podem ser relacionados à capacidade do agente em infectar o hospedeiro, assim como de sobreviver em um ambiente hostil. Exemplos são os genes que codificam estruturas como fímbrias e adesinas (ptfA, pfhA) ou proteínas de membrana externa (oma87). Também há os genes envolvidos em processos metabólicos, como sialidases (nanH, nanB) ou dismutases (sodA, sodC) e proteínas associadas ao transporte e ao metabolismo do ferro (hgbA, hgbB, exBD-tonB). Os cartões FTA (Flinders Technology Associates FilterPaper - WHATMAN® ) foram desenvolvidos para o transporte seguro de microrganismos inativados, podem ser armazenados e posteriormente utilizados em análises moleculares. Estes têm sido empregados para a coleta e transporte de amostras de alguns vírus e bactérias de interesse na área de sanidade avícola. Os objetivos do estudo foram avaliar a viabilidade do transporte de DNA de P. multocida através do emprego de cartões FTA e detectar quatorze genes associados à virulência em 27 cepas isoladas de CA nos Estados Unidos. Nenhuma das amostras coletadas para análise microbiológica a fim de avaliar a segurança dos cartões FTA apresentou crescimento de microrganismos. A extração e confirmação da presença do DNA de P. multocida foram possíveis em 100% (27/27) das amostras analisadas. Entre os genes de virulência pesquisados, ptfA, exbd-tonB, hgbA, nanB, oma87e hyaD-hyaC foram detectados em 100% (27/27) das cepas. Os genes sodC e hgbB em 96,3% (26/27), sodA em 92,6% (25/27), nanH em 85,2% (23/27) e pfhA em 81,5% (22/27). Os genes dcbF, bcbD e toxA não foram identificados em nenhuma das cepas pesquisadas. A partir dos resultados obtidos, os cartões FTA demonstraram ser uma ferramenta viável e segura para o transporte do DNA de P. multocida. Da mesma forma, a maioria dos genes pesquisados apresentou uma alta frequência, compatível com isolados obtidos de casos clínicos de CA.