Estudo da ação da proteína HSP70 extracelular sobre o receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE) em modelo celular

• Autor(a) principal: Somensi, Nauana
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/109925
• topic: Proteínas de choque térmico HSP70; Produtos finais de glicosilação; Sepsis; RAGE; Heat shock protein; Macrophage

A sepse é uma síndrome complexa, disparada pela infecção microbiana causada por um patógeno e é induzida pela ativação progressiva e sistêmica de múltiplas vias de respostas inflamatórias, resultando na disfunção aguda de alguns órgãos e culminando em falência múltipla. Pacientes sépticos apresentam uma alta taxa de ativação de macrófagos na corrente sanguínea que, em resposta aos sinais pró-inflamatórios, passam a produzir citocinas anti-inflamatórias. A resposta inflamatória é essencial para o combate bacteriano, mas em casos extremos, uma reação exacerbada pode levar ao choque séptico. O receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE) é uma proteína transmembrana multi-ligante da superfamília das imunoglobulinas; é descrito que durante a sepse ocorre um aumento na concentração plasmática dos ligantes deste receptor. Um dos efeitos principais da ativação de RAGE é a ativação redox-dependente de NF-kB, a qual leva à produção de TNF-α, sendo este um processo de retroalimentação positiva; tal mecanismo vem sendo sugerido como o eixo principal da intensificação/perpetuação de estados pró-inflamatórios. Esse trabalho visa elucidar a relação causal entre estresse oxidativo e HSP70 extracelular em um modelo celular de sepse, avaliando a modulação de tal mecanismo por via de RAGE. A linhagem celular de macrófagos RAW 264.7 foi desafiada com HSP70 e agonistas de RAGE, o que resultou na ativação da cascata de sinalização das MAPK. A fim de avaliar o parâmetro tempo/resposta, a proteína HSP70 foi adicionada às células em diferentes momentos, e a imunodetecção de cinases foi realizada. A expressão de RAGE foi validada em nossa linhagem de estudo na presença de LPS por um período de 24h, onde verificamos um aumento significativo nos níveis de RAGE. Com a finalidade de atenuar a expressão deste receptor, utilizou-se siRNA como ferramenta de silenciamento gênico; a eficiência da técnica foi baixa, uma vez que não se verificou diferença estatística nos níveis de expressão de RAGE nas células RAW 264.7.