Efeito da terapia gênica com o fato derivado de epitélio pigmentado (PEDF) via vetor viral AAV8 em modelo murinho de silicose

• Autor(a) principal: Braga, Igor Corrêa da Costa
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRJ
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11422/20165
• topic: Terapia genética; Silicose; Adenovírus associado; Genetic therapy; Silicosis; Adeno-associated virus; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA

A silicose é uma doença ocupacional relacionada à exposição de trabalhadores a partículas de sílica. A inalação da sílica leva a um processo inflamatório crônico do sistema respiratório e, posteriormente, uma doença fibrosante do parênquima pulmonar. Até o momento, não há um tratamento eficiente para impedir ou minimizar a evolução desta enfermidade. A terapia gênica, que em seu termo mais amplo, significa o tratamento de doenças genéticas ou adquiridas pela introdução de genes exógenos nas células de pacientes, surge como uma alternativa para o tratamento da silicose. Pode ser utilizado sistemas de transferência gênica tanto virais quanto não virais. Dentre os vetores virais, o adenovírus associado 8 (AAV8) surgiu como um vetor promissor para o tratamento de doenças respiratórias, pois, apresenta um tropismo natural para as células epiteliais das vias aéreas e é pouco imunogênico. Um gene promissor para a utilização na terapia gênica em silicose é o fator derivado de epitélio pigmentado (PEDF), pois ele possui atividade antiangiogênica, anti-inflamatória, antifibrótica e antioxidante. Portanto, o presente estudo visa demonstrar o potencial terapêutico do PEDF na silicose. Nesse contexto, foi avaliada a hipótese de que o gene codificador do PEDF, entregue pelo vetor AAV8, reduz a inflamação e o remodelamento pulmonar em modelo murino de silicose. Para tal, camundongos C57BL/6 fêmeas (20-25g) foram divididos aleatoriamente em dois grupos: controle (C) e sílica (SIL). O grupo controle foi subdividido em C-SAL e C-PEDF, e o grupo sílica (instilados com 20 mg/50 µL de sílica) subdividido em SIL-SAL e SIL-PEDF. Os animais dos subgrupos salina, C-SAL e SIL-SAL, foram instilados com 50 µl de salina, intratraquealmente (it) e os animais dos subgrupos PEDF, C-PEDF e SIL-PEDF, foram instilados com o vetor AAV8 carreando o gene codificador do PEDF (AAV8-PEDF), 1010 vg em 50 µL de salina, it. Realizamos três modelos experimentais: 1) vetor AAV8-PEDF instilado 15 dias depois da instilação de sílica, 2) vetor AAV8-PEDF instilado 1 dia antes da instilação de sílica e 3) vetor AAV8-PEDF instilado 28 dias antes da instilação de sílica. A quantidade relativa de RNAm, a mecânica respiratória e fração de área de granuloma foram investigados. A instilação de sílica provocou alterações histológicas no parênquima pulmonar, como a presença de granulomas (modelo 1 e 3), além de causar alta taxa de mortalidade. No modelo 1 não foi observado melhoras na função e histologia pulmonar, além da baixa expressão do gene PEDF no subgrupo SIL-PEDF. No modelo 2, os resultados da mecânica respiratória sugerem ausência do desenvolvimento da doença, também sendo observado redução na expressão do gene PEDF no subgrupo SIL-PEDF em comparação ao subgrupo C-PEDF. No terceiro modelo, não foi observada melhora na função e histologia pulmonar no subgrupo SIL-PEDF, além desse subgrupo apresentar uma diminuição da expressão do gene PEDF em relação ao subgrupo C-PEDF. Devido a alta taxa de mortalidade (modelo 2 e 3) o número experimental foi baixo, sendo necessário seu aumento para confirmação dos resultados. Portanto, mais estudos serão realizados para determinar o efeito da terapia gênica com o PEDF no tratamento silicose.