Propriedades imunomodulatórias e pró-carcinogênicas de macrófagos humanos resistentes à Cisplatina
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRJ |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11422/19390 |
Resumo: | Apesar do desenvolvimento dos esquemas terapêuticos, o tratamento do câncer ainda é deficiente. Isso é decorrente de um grande obstáculo que é o fenótipo de resistência a drogas. Neste contexto, fica mais evidente que diferentes células que constituem o microambiente tumoral modulam a aquisição de resistência e influenciam na progressão do câncer. Tumores sólidos mais agressivos, por exemplo, possuem altos níveis de macrófagos (Mϕ) que, assim como as células transformadas, ficam sujeitos aos efeitos de quimioterápicos e podem adquirir resistência, interferindo na progressão tumoral. Deste modo, nosso objetivo é induzir resistência em Mϕ humanos e verificar seu potencial imunomodulatório e pró carcinogênico. Para isso, monócitos (Monϕ) foram tratados com doses crescentes de cisplatina (Cis) e a toxicidade foi monitorada pelo ensaio de MTT. Posteriormente, as células foram tratadas durante 120 dias com uma concentração sub-letal do fármaco. O fenótipo de resistência foi determinado por PCR em tempo real (qPCR), visando investigar os níveis de transcritos que codificam proteínas anti- (Survivina e Bcl-xL) e pró- apoptóticas (Bad e Bax). A técnica de western blot (WB) foi utilizada para averiguar a expressão dos marcadores CD68 e transglutaminase-2 (TGase-2). Para a diferenciação em Mϕ, Monϕ foram tratados por 48 h com 320 nM de PMA, e os níveis de transcritos para citocinas pró- (TNF-α e IL-12) e anti inflamatórias (IL-4, IL-10 e TGF-β) foram analisados por qPCR. Para saber se a expressão de TGF-β é dependente de tempo, Mϕ tratados foram mantidos durante 10 dias sem a presença da droga e Mϕ parentais foram submetidos a um período de 48 h com a droga. Os dados obtidos demonstraram que o IC20 em Monϕ foi, inicialmente, de 25 nM e, após 6 meses de tratamento, aumentou para 50 nM. Ainda, após a diferenciação em Mϕ, foi observada uma sobrevida maior nos Mϕ tratados com relação aos parentais. O qPCR evidenciou que os níveis de transcritos para as proteínas anti-apoptóticas Bcl-2 e Survivina aumentaram nos Mϕ quimioresistentes. O WB revelou que Mϕ quimioresistentes expressam níveis significativamente maiores do marcador TGase-2, assim como a expressão do marcador CD68 em Mϕ aumentou com relação aos Monϕ. Os níveis protéicos de TGF-β no grupo mantido 10 dias sem tratamento permaneceu aumentado, enquanto o grupo que ficou durante um período de 48 h na presença da droga não houve diferença significativa quando comparado ao grupo controle. Com isso, nossos resultados revelaram que Mϕ quimioresistentes à CIS apresentam um perfil anti-inflamatório, caracterizado pela elevada expressão do marcador TGase-2 e das citocinas IL-10, IL-4 e TGF-β. Além disso, é possível concluir que a expressão aumentada de TGF-β é, de fato, um processo que ocorre após um longo período de quimioterapia e que se mantém mesmo se o tratamento for interrompido. Assim, sabendo-se que trabalhos recentes comprovaram que o TGF-β contribui para que células neoplásicas adquiram um fenótipo mais invasivo a partir da ativação do processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM), novos estudos serão necessários para confirmar se o meio condicionado de Mϕ quimioresistentes ativa vias de sinalização associadas a TEM, o que pode caracterizar um novo mecanismo de imunomodulação em câncer. |
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Chaves, Victória de Sousahttp://lattes.cnpq.br/1236415879013530Filardy, Alessandra D'AlmeidaPinto, Kamilla GuimarãesPão, Camila Ribeiro Rodrigues deFracalanzza, Sergio Eduardo LongoLima, Leonardo Freire de2022-12-15T18:19:33Z2023-11-30T03:05:24Z2018-12-07CHAVES, V. de S. (2018). Propriedades imunomodulatórias e pró-carcinogênicas de macrófagos humanos resistentes à Cisplatina [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.http://hdl.handle.net/11422/19390Submitted by Luiza Arias (luiza@micro.ufrj.br) on 2022-12-15T18:19:33Z No. of bitstreams: 1 VSChaves.pdf: 1576395 bytes, checksum: 0abff27c9ab73e53a4ff779ddf4d69d8 (MD5)Made available in DSpace on 2022-12-15T18:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VSChaves.pdf: 1576395 bytes, checksum: 0abff27c9ab73e53a4ff779ddf4d69d8 (MD5) Previous issue date: 2018-12-07Apesar do desenvolvimento dos esquemas terapêuticos, o tratamento do câncer ainda é deficiente. Isso é decorrente de um grande obstáculo que é o fenótipo de resistência a drogas. Neste contexto, fica mais evidente que diferentes células que constituem o microambiente tumoral modulam a aquisição de resistência e influenciam na progressão do câncer. Tumores sólidos mais agressivos, por exemplo, possuem altos níveis de macrófagos (Mϕ) que, assim como as células transformadas, ficam sujeitos aos efeitos de quimioterápicos e podem adquirir resistência, interferindo na progressão tumoral. Deste modo, nosso objetivo é induzir resistência em Mϕ humanos e verificar seu potencial imunomodulatório e pró carcinogênico. Para isso, monócitos (Monϕ) foram tratados com doses crescentes de cisplatina (Cis) e a toxicidade foi monitorada pelo ensaio de MTT. Posteriormente, as células foram tratadas durante 120 dias com uma concentração sub-letal do fármaco. O fenótipo de resistência foi determinado por PCR em tempo real (qPCR), visando investigar os níveis de transcritos que codificam proteínas anti- (Survivina e Bcl-xL) e pró- apoptóticas (Bad e Bax). A técnica de western blot (WB) foi utilizada para averiguar a expressão dos marcadores CD68 e transglutaminase-2 (TGase-2). Para a diferenciação em Mϕ, Monϕ foram tratados por 48 h com 320 nM de PMA, e os níveis de transcritos para citocinas pró- (TNF-α e IL-12) e anti inflamatórias (IL-4, IL-10 e TGF-β) foram analisados por qPCR. Para saber se a expressão de TGF-β é dependente de tempo, Mϕ tratados foram mantidos durante 10 dias sem a presença da droga e Mϕ parentais foram submetidos a um período de 48 h com a droga. Os dados obtidos demonstraram que o IC20 em Monϕ foi, inicialmente, de 25 nM e, após 6 meses de tratamento, aumentou para 50 nM. Ainda, após a diferenciação em Mϕ, foi observada uma sobrevida maior nos Mϕ tratados com relação aos parentais. O qPCR evidenciou que os níveis de transcritos para as proteínas anti-apoptóticas Bcl-2 e Survivina aumentaram nos Mϕ quimioresistentes. O WB revelou que Mϕ quimioresistentes expressam níveis significativamente maiores do marcador TGase-2, assim como a expressão do marcador CD68 em Mϕ aumentou com relação aos Monϕ. Os níveis protéicos de TGF-β no grupo mantido 10 dias sem tratamento permaneceu aumentado, enquanto o grupo que ficou durante um período de 48 h na presença da droga não houve diferença significativa quando comparado ao grupo controle. Com isso, nossos resultados revelaram que Mϕ quimioresistentes à CIS apresentam um perfil anti-inflamatório, caracterizado pela elevada expressão do marcador TGase-2 e das citocinas IL-10, IL-4 e TGF-β. Além disso, é possível concluir que a expressão aumentada de TGF-β é, de fato, um processo que ocorre após um longo período de quimioterapia e que se mantém mesmo se o tratamento for interrompido. Assim, sabendo-se que trabalhos recentes comprovaram que o TGF-β contribui para que células neoplásicas adquiram um fenótipo mais invasivo a partir da ativação do processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM), novos estudos serão necessários para confirmar se o meio condicionado de Mϕ quimioresistentes ativa vias de sinalização associadas a TEM, o que pode caracterizar um novo mecanismo de imunomodulação em câncer.porUniversidade Federal do Rio de JaneiroUFRJBrasilInstituto de Microbiologia Paulo de GóesCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIACNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIAMacrófagosNeoplasiasAlergia e ImunologiaCisplatinoMacrophagesNeoplasmsAllergy and ImmunologyCisplatinPropriedades imunomodulatórias e pró-carcinogênicas de macrófagos humanos resistentes à Cisplatinainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisabertoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFRJinstname:Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)instacron:UFRJLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81853http://pantheon.ufrj.br:80/bitstream/11422/19390/2/license.txtdd32849f2bfb22da963c3aac6e26e255MD52ORIGINALVSChaves.pdfVSChaves.pdfapplication/pdf1576395http://pantheon.ufrj.br:80/bitstream/11422/19390/1/VSChaves.pdf0abff27c9ab73e53a4ff779ddf4d69d8MD5111422/193902023-11-30 00:05:24.206oai:pantheon.ufrj.br:11422/19390TElDRU7Dh0EgTsODTy1FWENMVVNJVkEgREUgRElTVFJJQlVJw4fDg08KCkFvIGFzc2luYXIgZSBlbnRyZWdhciBlc3RhIGxpY2Vuw6dhLCB2b2PDqihzKSBvKHMpIGF1dG9yKGVzKSBvdSBwcm9wcmlldMOhcmlvKHMpIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBjb25jZWRlKG0pIGFvIFJlcG9zaXTDs3JpbyBQYW50aGVvbiBkYSBVbml2ZXJzaWRhZGUgRmVkZXJhbCBkbyBSaW8gZGUgSmFuZWlybyAoVUZSSikgbyBkaXJlaXRvIG7Do28gLSBleGNsdXNpdm8gZGUgcmVwcm9kdXppciwgY29udmVydGVyIChjb21vIGRlZmluaWRvIGFiYWl4byksIGUvb3UgZGlzdHJpYnVpciBvIGRvY3VtZW50byBlbnRyZWd1ZSAoaW5jbHVpbmRvIG8gcmVzdW1vKSBlbSB0b2RvIG8gbXVuZG8sIGVtIGZvcm1hdG8gZWxldHLDtG5pY28gZSBlbSBxdWFscXVlciBtZWlvLCBpbmNsdWluZG8sIG1hcyBuw6NvIGxpbWl0YWRvIGEgw6F1ZGlvIGUvb3UgdsOtZGVvLgoKVm9jw6ogY29uY29yZGEgcXVlIGEgVUZSSiBwb2RlLCBzZW0gYWx0ZXJhciBvIGNvbnRlw7pkbywgdHJhZHV6aXIgYSBhcHJlc2VudGHDp8OjbyBkZSBxdWFscXVlciBtZWlvIG91IGZvcm1hdG8gY29tIGEgZmluYWxpZGFkZSBkZSBwcmVzZXJ2YcOnw6NvLgoKVm9jw6ogdGFtYsOpbSBjb25jb3JkYSBxdWUgYSBVRlJKIHBvZGUgbWFudGVyIG1haXMgZGUgdW1hIGPDs3BpYSBkZXNzYSBzdWJtaXNzw6NvIHBhcmEgZmlucyBkZSBzZWd1cmFuw6dhLCBiYWNrLXVwIGUgcHJlc2VydmHDp8OjbyBkaWdpdGFsLgoKRGVjbGFyYSBxdWUgbyBkb2N1bWVudG8gZW50cmVndWUgw6kgc2V1IHRyYWJhbGhvIG9yaWdpbmFsLCBlIHF1ZSB2b2PDqiB0ZW0gbyBkaXJlaXRvIGRlIGNvbmNlZGVyIG9zIGRpcmVpdG9zIGNvbnRpZG9zIG5lc3RhIGxpY2Vuw6dhLiBWb2PDqiB0YW1iw6ltIGRlY2xhcmEgcXVlIGEgc3VhIGFwcmVzZW50YcOnw6NvLCBjb20gbyBtZWxob3IgZGUgc2V1cyBjb25oZWNpbWVudG9zLCBuw6NvIGluZnJpbmdpIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIGRlIHRlcmNlaXJvcy4KClNlIG8gZG9jdW1lbnRvIGVudHJlZ3VlIGNvbnTDqW0gbWF0ZXJpYWwgZG8gcXVhbCB2b2PDqiBuw6NvIHRlbSBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvciwgZGVjbGFyYSBxdWUgb2J0ZXZlIGEgcGVybWlzc8OjbyBpcnJlc3RyaXRhIGRvIGRldGVudG9yIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBlIGNvbmNlZGUgYSBVRlJKIG9zIGRpcmVpdG9zIHJlcXVlcmlkb3MgcG9yIGVzdGEgbGljZW7Dp2EsIGUgcXVlIGVzc2UgbWF0ZXJpYWwgZGUgcHJvcHJpZWRhZGUgZGUgdGVyY2Vpcm9zIGVzdMOhIGNsYXJhbWVudGUgaWRlbnRpZmljYWRvIGUgcmVjb25oZWNpZG8gbm8gdGV4dG8gb3UgY29udGXDumRvIGRhIHN1Ym1pc3PDo28uCgpTZSBvIGRvY3VtZW50byBlbnRyZWd1ZSDDqSBiYXNlYWRvIGVtIHRyYWJhbGhvIHF1ZSBmb2ksIG91IHRlbSBzaWRvIHBhdHJvY2luYWRvIG91IGFwb2lhZG8gcG9yIHVtYSBhZ8OqbmNpYSBvdSBvdXRybyhzKSBvcmdhbmlzbW8ocykgcXVlIG7Do28gYSBVRlJKLCB2b2PDqiBkZWNsYXJhIHF1ZSBjdW1wcml1IHF1YWxxdWVyIGRpcmVpdG8gZGUgUkVWSVPDg08gb3UgZGUgb3V0cmFzIG9icmlnYcOnw7VlcyByZXF1ZXJpZGFzIHBvciBjb250cmF0byBvdSBhY29yZG8uCgpBIFVGUkogaXLDoSBpZGVudGlmaWNhciBjbGFyYW1lbnRlIG8ocykgc2V1KHMpIG5vbWUocykgY29tbyBhdXRvcihlcykgb3UgcHJvcHJpZXTDoXJpbyhzKSBkYSBzdWJtaXNzw6NvLCBlIG7Do28gZmFyw6EgcXVhbHF1ZXIgYWx0ZXJhw6fDo28sIHBhcmEgYWzDqW0gZGFzIHBlcm1pdGlkYXMgcG9yIGVzdGEgbGljZW7Dp2EsIG5vIGF0byBkZSBzdWJtaXNzw6NvLgo=Repositório de PublicaçõesPUBhttp://www.pantheon.ufrj.br/oai/requestopendoar:2023-11-30T03:05:24Repositório Institucional da UFRJ - Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)false |
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