Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRN |
Texto Completo: | https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/52315 |
Resumo: | Os plasmídeos (pDNAs) são ferramentas biotecnológicas, usados principalmente na área de vacinas de DNA. A agência Food and Drug Administration recomenda a utilização da isoforma superenrolada dos plasmídeos em protocolos de imunização, estudos conferem a isoforma superenrolada a eficiência de transferência gênica. A isoforma superenrolada é degrada por nucleases presentes no plasma e no interior das células. A nanotecnologia vem sendo usada como uma alternativa para proteção do plasmídeo contra nucleases e entrega eficiente as células alvo. Tendo em vista a importância da estabilidade estrutural de pDNAs na sua função biológica, esse estudo objetivou avaliar a estabilidade de dois pDNAs, o pVAX1 e pVAX1LacZ, e formular estes a nanopartículas catiônicas. Foi produzido um protocolo de degradação utilizando variáveis de temperatura de incubação, tamanho do plasmídeo e concentração de soro, fonte de nucleases para avaliar a estabilidade dos plasmídeos. Posteriormente, os pDNAs foram formulados com nanopartículas catiônicas, e sua estabilidade frente a variáveis de tempo e concentração de soro foram testadas. O protocolo desenvolvido demonstrou degradação total dos plasmídeos nas maiores concentrações de soro, a temperatura influenciou de forma direta, a 37 °C ocorreu a maior atividade de degradação dos pDNAs, sendo o pDNA de maior tamanho, o mais degradado. As nanopartículas catiônicas obtiveram 100% de associação com o pDNA, com características físico químicas dentro do padrão requerido. A formulação demonstrou estabilidade em função do tempo, e quando em contato com diferentes diluições do soro humano, não ocorreu degradação do plasmídeo associado. A preparação de nanopartículas catiônicas com pDNA associado se mostrou um sistema promissor para conferir proteção ao pDNA, direcionando a mais estudos in vitro e in vivo dessa formulação. |
id |
UFRN_7e06d3dcd3e2c69400243b9dc173c6fb |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/52315 |
network_acronym_str |
UFRN |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFRN |
repository_id_str |
|
spelling |
Cardoso, Anna Clara de Araújohttp://lattes.cnpq.br/3358002467400398https://orcid.org/0000-0002-1000-0149http://lattes.cnpq.br/1295430560645312Silva Júnior, Arnobio Antônio dahttps://orcid.org/0000-0002-7516-1787http://lattes.cnpq.br/2593509584288129Lacerda, Ariane FerreiraSantos, Elizabeth Cristina Gomes dosSilva, Marcelo de Sousa da2023-05-11T20:09:56Z2023-05-11T20:09:56Z2019-03-28CARDOSO, Anna Clara de Araújo. Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica. Orientador: Marcelo de Sousa da Silva. 2019. 72f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2019.https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/52315Os plasmídeos (pDNAs) são ferramentas biotecnológicas, usados principalmente na área de vacinas de DNA. A agência Food and Drug Administration recomenda a utilização da isoforma superenrolada dos plasmídeos em protocolos de imunização, estudos conferem a isoforma superenrolada a eficiência de transferência gênica. A isoforma superenrolada é degrada por nucleases presentes no plasma e no interior das células. A nanotecnologia vem sendo usada como uma alternativa para proteção do plasmídeo contra nucleases e entrega eficiente as células alvo. Tendo em vista a importância da estabilidade estrutural de pDNAs na sua função biológica, esse estudo objetivou avaliar a estabilidade de dois pDNAs, o pVAX1 e pVAX1LacZ, e formular estes a nanopartículas catiônicas. Foi produzido um protocolo de degradação utilizando variáveis de temperatura de incubação, tamanho do plasmídeo e concentração de soro, fonte de nucleases para avaliar a estabilidade dos plasmídeos. Posteriormente, os pDNAs foram formulados com nanopartículas catiônicas, e sua estabilidade frente a variáveis de tempo e concentração de soro foram testadas. O protocolo desenvolvido demonstrou degradação total dos plasmídeos nas maiores concentrações de soro, a temperatura influenciou de forma direta, a 37 °C ocorreu a maior atividade de degradação dos pDNAs, sendo o pDNA de maior tamanho, o mais degradado. As nanopartículas catiônicas obtiveram 100% de associação com o pDNA, com características físico químicas dentro do padrão requerido. A formulação demonstrou estabilidade em função do tempo, e quando em contato com diferentes diluições do soro humano, não ocorreu degradação do plasmídeo associado. A preparação de nanopartículas catiônicas com pDNA associado se mostrou um sistema promissor para conferir proteção ao pDNA, direcionando a mais estudos in vitro e in vivo dessa formulação.The plasmids (pDNAs) have been standing out regarding to its application at biotechnology, mostly in DNA vaccination and genic therapy. pDNAs are DNA molecules with extra chromosomal double bands, presenting circular shape and have different isoforms. The Food and Drug Administration recommends that during pDNAs utilization on immunization protocols, they must be at least 80% on its super-curled isoform, once the studies assign that super-curled isoforms have a larger access to the interior of cells. Super curled isoform may be altered by chemical, physical and biological factors. Owing to its importance at pDNAs structure stability at biological function, this study aims to evaluate the pDNAs stability used at biotechnology, ands tests a nanoformulation with polyethyleneimine (PEI) associated to pDNAs, in order to promote a stability and bioavailability increasing of pDNAs. We evaluate the temperature effect at incubation, plasmid size and nucleases concentrations under super-curled isoform conservation. Also, it was evaluated pDNAs stability using functionalized nanoparticles with PEI through time variables, nucleases concentration and comparing to non functionalized nanoparticles formulated pDNAs. On 37°C and 42°C temperatures, there was higher degradation on plasmids, as well as higher serum concentration, presenting super-curly isoforms only at 1:64 dilution. The smaller sized plasmid presented lower degradation in all the tests. The preparation of functionalized nanoparticles with PEI associated to pDNA showed to be a promising alternative of protection against enzymatic degradation, with 100% efficiency of plasmid association. However, it requires more in vitro and in vivo studies to verify security factors and genic transference rate.Universidade Federal do Rio Grande do NortePROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICASUFRNBrasilCNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIAPlasmídeosVacinas de DNANanopartículasPlasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológicainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFRNinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)instacron:UFRNORIGINALPlasmideosformuladosnanoparticulas_Cardoso_2019.pdfapplication/pdf1151276https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/52315/1/Plasmideosformuladosnanoparticulas_Cardoso_2019.pdfeaceeee5160f4f38b1e945ca8f388391MD51123456789/523152023-05-11 17:10:41.554oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/52315Repositório de PublicaçõesPUBhttp://repositorio.ufrn.br/oai/opendoar:2023-05-11T20:10:41Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
title |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
spellingShingle |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica Cardoso, Anna Clara de Araújo CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA Plasmídeos Vacinas de DNA Nanopartículas |
title_short |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
title_full |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
title_fullStr |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
title_full_unstemmed |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
title_sort |
Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica |
author |
Cardoso, Anna Clara de Araújo |
author_facet |
Cardoso, Anna Clara de Araújo |
author_role |
author |
dc.contributor.authorLattes.pt_BR.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/3358002467400398 |
dc.contributor.advisorID.pt_BR.fl_str_mv |
https://orcid.org/0000-0002-1000-0149 |
dc.contributor.advisorLattes.pt_BR.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/1295430560645312 |
dc.contributor.referees1.none.fl_str_mv |
Silva Júnior, Arnobio Antônio da |
dc.contributor.referees1ID.pt_BR.fl_str_mv |
https://orcid.org/0000-0002-7516-1787 |
dc.contributor.referees1Lattes.pt_BR.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/2593509584288129 |
dc.contributor.referees2.none.fl_str_mv |
Lacerda, Ariane Ferreira |
dc.contributor.referees3.none.fl_str_mv |
Santos, Elizabeth Cristina Gomes dos |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Cardoso, Anna Clara de Araújo |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Silva, Marcelo de Sousa da |
contributor_str_mv |
Silva, Marcelo de Sousa da |
dc.subject.cnpq.fl_str_mv |
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA |
topic |
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA Plasmídeos Vacinas de DNA Nanopartículas |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Plasmídeos Vacinas de DNA Nanopartículas |
description |
Os plasmídeos (pDNAs) são ferramentas biotecnológicas, usados principalmente na área de vacinas de DNA. A agência Food and Drug Administration recomenda a utilização da isoforma superenrolada dos plasmídeos em protocolos de imunização, estudos conferem a isoforma superenrolada a eficiência de transferência gênica. A isoforma superenrolada é degrada por nucleases presentes no plasma e no interior das células. A nanotecnologia vem sendo usada como uma alternativa para proteção do plasmídeo contra nucleases e entrega eficiente as células alvo. Tendo em vista a importância da estabilidade estrutural de pDNAs na sua função biológica, esse estudo objetivou avaliar a estabilidade de dois pDNAs, o pVAX1 e pVAX1LacZ, e formular estes a nanopartículas catiônicas. Foi produzido um protocolo de degradação utilizando variáveis de temperatura de incubação, tamanho do plasmídeo e concentração de soro, fonte de nucleases para avaliar a estabilidade dos plasmídeos. Posteriormente, os pDNAs foram formulados com nanopartículas catiônicas, e sua estabilidade frente a variáveis de tempo e concentração de soro foram testadas. O protocolo desenvolvido demonstrou degradação total dos plasmídeos nas maiores concentrações de soro, a temperatura influenciou de forma direta, a 37 °C ocorreu a maior atividade de degradação dos pDNAs, sendo o pDNA de maior tamanho, o mais degradado. As nanopartículas catiônicas obtiveram 100% de associação com o pDNA, com características físico químicas dentro do padrão requerido. A formulação demonstrou estabilidade em função do tempo, e quando em contato com diferentes diluições do soro humano, não ocorreu degradação do plasmídeo associado. A preparação de nanopartículas catiônicas com pDNA associado se mostrou um sistema promissor para conferir proteção ao pDNA, direcionando a mais estudos in vitro e in vivo dessa formulação. |
publishDate |
2019 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2019-03-28 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2023-05-11T20:09:56Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2023-05-11T20:09:56Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
CARDOSO, Anna Clara de Araújo. Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica. Orientador: Marcelo de Sousa da Silva. 2019. 72f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2019. |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/52315 |
identifier_str_mv |
CARDOSO, Anna Clara de Araújo. Plasmídeos formulados com nanopartículas catiônicas: análise da estabilidade físico química e biológica. Orientador: Marcelo de Sousa da Silva. 2019. 72f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2019. |
url |
https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/52315 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal do Rio Grande do Norte |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
UFRN |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
Brasil |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal do Rio Grande do Norte |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFRN instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) instacron:UFRN |
instname_str |
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) |
instacron_str |
UFRN |
institution |
UFRN |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFRN |
collection |
Repositório Institucional da UFRN |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/52315/1/Plasmideosformuladosnanoparticulas_Cardoso_2019.pdf |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
eaceeee5160f4f38b1e945ca8f388391 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1802117700623794176 |