Intein Prp8: potencial terapêutico de um elemento genético invasivo
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRN |
Texto Completo: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27158 |
Resumo: | Inteins são elementos genéticos invasivos que ocorrem inseridos em genes codificadores, normalmente constitutivos e essenciais, e que são transcritos e traduzidos juntamente à sequência hospedeira para então catalisarem seu próprio splicing proteico e reestabelecimento da conformação funcional da proteína hospedeira. Neste trabalho, foi criado um modelo experimental para a avaliação da função splicing do intein Prp8, em Saccharomyces cerevisiae, usando o gene URA3 como hospedeiro do intein Prp8 do fungo patogênico Cryptococcus neoformans (CnePrp8i). Como este intein também ocorre em outros importantes patógenos fúngicos causadores de micoses cutâneas e sistêmicas e está ausente no genoma humano, ele é considerado um potencial alvo terapêutico uma vez que, tendo o seu splicing inibido, o intein permaneceria na proteína hospedeira inviabilizando seu funcionamento. Neste trabalho duas construções contendo o intein CnePrp8 foram testadas, sendo que em uma delas, foi possível observar o splicing do elemento e a manutenção da função de sua proteína hospedeira heteróloga, a Ura3. A presença do intein no RNAm foi confirmada por RT-PCR, e descartou-se a possibilidade de splicing a nível de RNAm. A presença da proteína foi confirmada por Western Blot; e sua função foi observada pelo crescimento em meios sintéticos completos sem histidina e uracila, e no meio 5-FoA. A Cisplatina já foi descrita como inibidora do splicing do intein RecA de Mycobacterium tuberculosis e por isso foi testada como um possível validador, mas observou-se pouca influência na inibição do splicing do intein no modelo proposto. A criação deste sistema heterólogo permitirá o teste de drogas que potencialmente inibam o splicing do CnePrp8i. |
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Fernandes, José Alex LourençoArantes, Thales DomingosSouza, Gustavo Antonio deSilva, Lívia Kmetzsch Rosa eTheodoro, Raquel Cordeiro2019-06-06T19:35:02Z2018-12-20FERNANDES, José Alex Lourenço. Intein Prp8: potencial terapêutico de um elemento genético invasivo. 2018. 144f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2018.https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27158Inteins são elementos genéticos invasivos que ocorrem inseridos em genes codificadores, normalmente constitutivos e essenciais, e que são transcritos e traduzidos juntamente à sequência hospedeira para então catalisarem seu próprio splicing proteico e reestabelecimento da conformação funcional da proteína hospedeira. Neste trabalho, foi criado um modelo experimental para a avaliação da função splicing do intein Prp8, em Saccharomyces cerevisiae, usando o gene URA3 como hospedeiro do intein Prp8 do fungo patogênico Cryptococcus neoformans (CnePrp8i). Como este intein também ocorre em outros importantes patógenos fúngicos causadores de micoses cutâneas e sistêmicas e está ausente no genoma humano, ele é considerado um potencial alvo terapêutico uma vez que, tendo o seu splicing inibido, o intein permaneceria na proteína hospedeira inviabilizando seu funcionamento. Neste trabalho duas construções contendo o intein CnePrp8 foram testadas, sendo que em uma delas, foi possível observar o splicing do elemento e a manutenção da função de sua proteína hospedeira heteróloga, a Ura3. A presença do intein no RNAm foi confirmada por RT-PCR, e descartou-se a possibilidade de splicing a nível de RNAm. A presença da proteína foi confirmada por Western Blot; e sua função foi observada pelo crescimento em meios sintéticos completos sem histidina e uracila, e no meio 5-FoA. A Cisplatina já foi descrita como inibidora do splicing do intein RecA de Mycobacterium tuberculosis e por isso foi testada como um possível validador, mas observou-se pouca influência na inibição do splicing do intein no modelo proposto. A criação deste sistema heterólogo permitirá o teste de drogas que potencialmente inibam o splicing do CnePrp8i.Inteins are genetic mobile elements that occur inserted within protein-coding genes, which are, usually, housekeeping genes. They are transcribed and translated along with the host gene, then catalyze their own splicing from its host protein, re-establishing their functional conformation. We developed an experimenal model to evaluate the splicing of Prp8 intein from the yeast pathogen Cryptococcus neoformans (CnePrp8i) in Saccharomyces cerevisiae Ura3 protein-coding gene as the non-native protein host for CnePrp8i. Since Prp8 inteins are found in several important fungal pathogens, causing from cutaneous to systemic mycosis, and are absent in mammals, they are considered potential therapeutic targets, because once their splicing is inhibited, the host protein would be no longer functional. Two different CnePrp8i-containing constructions were created and tested, although in only one of them the intein splicing was possible, as well as the full functionality of the host protein, the Ura3. In order to rule out any possible RNA splicing the presence of CnePrp8i at the mRNA level was confirmed by RT-PCR and the Ura3 expression was confirmed by cell grown on appropriate media (SC –His –Ura and 5-FoA media), as well as by western-blot. Cisplatin has been described as a RecA intein splicing inhibitor in Mycobacterium tuberculosis and therefore was tested as a possible validator, but it showed a low inhibition in our system. By using this heterologous system, new potential protein splicing inhibitors may be discovered and used in the future as a new class of drugs for mycosis treatment.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)2020-03-18CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICASplicing proteicoIntein Prp8CryptococcusSaccharomycesUra3CnePrp8iIntein Prp8: potencial terapêutico de um elemento genético invasivoPrp8 Intein: therapeutic potential of an invasive genetic elementinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICAUFRNBrasilinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFRNinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)instacron:UFRNORIGINALInteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdfapplication/pdf10277640https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/27158/1/InteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdfe48cb5ddb2e9bb09dd6253eac5654164MD51TEXTInteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.txtInteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.txtExtracted texttext/plain188129https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/27158/2/InteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.txt0686990f15278f6995f8ee7d42719810MD52THUMBNAILInteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.jpgInteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1210https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/27158/3/InteinPrp8potencial_Fernandes_2018.pdf.jpga5c7f09848b9aed210508965e9426ad5MD53123456789/271582024-03-19 01:02:18.271oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/27158Repositório de PublicaçõesPUBhttp://repositorio.ufrn.br/oai/opendoar:2024-03-19T04:02:18Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)false |
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