Intein Prp8: potencial terapêutico de um elemento genético invasivo

• Autor(a) principal: Fernandes, José Alex Lourenço
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRN
• Texto Completo: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27158
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA; Splicing proteico; Intein Prp8; Cryptococcus; Saccharomyces; Ura3; CnePrp8i

Inteins são elementos genéticos invasivos que ocorrem inseridos em genes codificadores, normalmente constitutivos e essenciais, e que são transcritos e traduzidos juntamente à sequência hospedeira para então catalisarem seu próprio splicing proteico e reestabelecimento da conformação funcional da proteína hospedeira. Neste trabalho, foi criado um modelo experimental para a avaliação da função splicing do intein Prp8, em Saccharomyces cerevisiae, usando o gene URA3 como hospedeiro do intein Prp8 do fungo patogênico Cryptococcus neoformans (CnePrp8i). Como este intein também ocorre em outros importantes patógenos fúngicos causadores de micoses cutâneas e sistêmicas e está ausente no genoma humano, ele é considerado um potencial alvo terapêutico uma vez que, tendo o seu splicing inibido, o intein permaneceria na proteína hospedeira inviabilizando seu funcionamento. Neste trabalho duas construções contendo o intein CnePrp8 foram testadas, sendo que em uma delas, foi possível observar o splicing do elemento e a manutenção da função de sua proteína hospedeira heteróloga, a Ura3. A presença do intein no RNAm foi confirmada por RT-PCR, e descartou-se a possibilidade de splicing a nível de RNAm. A presença da proteína foi confirmada por Western Blot; e sua função foi observada pelo crescimento em meios sintéticos completos sem histidina e uracila, e no meio 5-FoA. A Cisplatina já foi descrita como inibidora do splicing do intein RecA de Mycobacterium tuberculosis e por isso foi testada como um possível validador, mas observou-se pouca influência na inibição do splicing do intein no modelo proposto. A criação deste sistema heterólogo permitirá o teste de drogas que potencialmente inibam o splicing do CnePrp8i.