Purificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallida
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Data de Publicação: | 2004 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRN |
Texto Completo: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/12530 |
Resumo: | A proteinaceous trypsin inhibitor was purified from Crotalaria pallida seeds by ammonium sulphate fractionation, affinity chromatography on immobilized Trypsin-Sepharose and TCA precipitation. The trypsin inhibitor, named ITC, had Mr of 32.5 kDa by SDS-PAGE and was composed by two subunits with 27.7 and 5.6 kDa linked by disulphide bridges, a typical characteristic of Kunitz-Inhibitor family. ITC was stable until 50°C, and at 100°C its residual activity was of about 60%. Also, ITC was stable at pHs 2 to 12. The inhibition of trypsin by ITC was non-competitive, with a Ki of 8,8 x 10-7M. ITC inhibits weakly other serine proteinases such as chymotrypsin and elastase. The inhibition of papain (44% of inhibition), a cysteine proteinase was an indicative of the bi-functionality of ITC. In vitro assays against digestive proteinases from several Lepdoptera, Diptera and Coleoptera pests were made. ITC inhibited in 100% digestive enzymes of Ceratitis capitata (fruit fly), Spodoptera frugiperda and Alabama argillacea, the last one being a cotton pest. It also inhibited in 74.4% Callosobruchus maculatus (bean weevil) digestive enzymes, a Coleoptera pest. ITC, when added in artificial diet models, affected weakly the development of C. capitata larvae and it had a WD50 of 2.65% to C. maculatus larvae |
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The trypsin inhibitor, named ITC, had Mr of 32.5 kDa by SDS-PAGE and was composed by two subunits with 27.7 and 5.6 kDa linked by disulphide bridges, a typical characteristic of Kunitz-Inhibitor family. ITC was stable until 50°C, and at 100°C its residual activity was of about 60%. Also, ITC was stable at pHs 2 to 12. The inhibition of trypsin by ITC was non-competitive, with a Ki of 8,8 x 10-7M. ITC inhibits weakly other serine proteinases such as chymotrypsin and elastase. The inhibition of papain (44% of inhibition), a cysteine proteinase was an indicative of the bi-functionality of ITC. In vitro assays against digestive proteinases from several Lepdoptera, Diptera and Coleoptera pests were made. ITC inhibited in 100% digestive enzymes of Ceratitis capitata (fruit fly), Spodoptera frugiperda and Alabama argillacea, the last one being a cotton pest. It also inhibited in 74.4% Callosobruchus maculatus (bean weevil) digestive enzymes, a Coleoptera pest. ITC, when added in artificial diet models, affected weakly the development of C. capitata larvae and it had a WD50 of 2.65% to C. maculatus larvaeUm inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipitação com ácido tricloroacético (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e é composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma característica típica da família de inibidores de Kunitz. ITC foi estável até 50°C e a 100°C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC também foi estável em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibição da tripsina por ITC é do tipo não-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases serínicas como quimotripsina e elastase. A inibição da papaína (44%), uma proteinase cisteínica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de vários insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algodão), e Alabama argillacea (curuquerê do algodão). ITC também inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feijão) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatusCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorapplication/pdfporUniversidade Federal do Rio Grande do NortePrograma de Pós-Graduação em BioquímicaUFRNBRBioquímica; Biologia MolecularProteínas - bioquímicaInibidores de tripsina - sementesAtividade biológica - enzimas digestivasCultura agrícola - nordesteBiossínteseCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICAPurificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallidainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFRNinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)instacron:UFRNTEXTCarlosEMG.pdf.txtCarlosEMG.pdf.txtExtracted texttext/plain114127https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/12530/6/CarlosEMG.pdf.txtbe417755040910a16d2a0d0e7740b07fMD56PurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.txtPurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.txtExtracted texttext/plain114127https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/12530/8/PurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.txtbe417755040910a16d2a0d0e7740b07fMD58THUMBNAILCarlosEMG.pdf.jpgCarlosEMG.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2075https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/12530/7/CarlosEMG.pdf.jpg233200aa9ccaf5a59b716c54b0dee777MD57PurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.jpgPurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2072https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/12530/9/PurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdf.jpg2f00eb46f65215b1e99a5f3ffa7692fcMD59ORIGINALPurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdfapplication/pdf434119https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/12530/1/PurificacaoCaracterizacaoAtividade_Gomes_2004.pdfcffd1dddf77ec049b23dadc1bfa89773MD51123456789/125302019-01-29 16:47:22.905oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/12530Repositório de PublicaçõesPUBhttp://repositorio.ufrn.br/oai/opendoar:2019-01-29T19:47:22Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)false |
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