Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRN |
Texto Completo: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/23708 |
Resumo: | O clopidogrel é um fármaco utilizado na terapia para prevenção de trombose e aterosclerose. Contudo, a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel é um potencial efeito adverso relacionado com lesões hepáticas e resposta antiplaquetária. Considerando a falta de diagnóstico precoce para esse efeito adverso, miRNAs derivados de exossomos podem ser úteis para contribuir para o monitoramento da resposta antiplaquetária e na predição do risco de hepatotoxicidade. Portanto, primeiramente objetivamos investigar as interações miRNA-mRNA com a toxicidade do fármaco in silico utilizando dados de microarrays disponíveis e software Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA). Em seguida, o perfil de expressão exossomal dos miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p e miR-4701-3p, bem como os mRNAs alvos (PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB e TLK1) derivados de células foram avaliadas in vitro, uma vez que estes foram os alvos moleculares principalmente associados ao efeito adverso. Assim, células HepG2 foram incubadas com clopidogrel a 6,25, 12,5, 25, 50 e 100 μM durante 24 e 48 h. A citotoxicidade foi avaliada por citometria de fluxo pela análise da fragmentação do DNA e do ciclo celular. A expressão de miRNA derivados de exossomos e de mRNA derivados de células foi avaliado pela RT-qPCR. As células tratadas com concentrações mais elevadas de 50 e 100 μM causaram maior fragmentação do DNA após 24 e 48 h sugerindo ser uma concentração tóxica. A expressão do miR-26a-5p foi elevada e a expressão do miR-15b-5p foi diminuída na concentração tóxica 100 μM em relação ao controle em 24 e 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB e SENP5 alvos do miR-26a-5p foram pouco expressos nas concentrações tóxicas em 24 h e o HMGA2 se manteve pouco expresso depois de 48 h de tratamento, em relação ao controle. TLK1, alvo do miR-15b-5p, teve expressão diminuída em 24 h na concentração tóxica. Os resultados sugerem que concentrações tóxicas de clopidogrel podem modular a expressão de miR-26a-5p e miR-15b-5p e seus alvos de mRNA. Além disso, o miR-26a pode representar um marcador importante para prever a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel |
id |
UFRN_b02bde6de2e665cba0b510feee4e6a2f |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/23708 |
network_acronym_str |
UFRN |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFRN |
repository_id_str |
|
spelling |
Freitas, Renata Caroline Costa dehttp://lattes.cnpq.br/7118101315881678http://lattes.cnpq.br/4420863418928278Rezende, Adriana Augusto dehttp://lattes.cnpq.br/4245215108740331Hirata, Mário Hiroyukihttp://lattes.cnpq.br/8551642748793896Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo dehttp://lattes.cnpq.br/58826625349042262017-08-07T12:11:18Z2017-08-07T12:11:18Z2017-06-16FREITAS, Renata Caroline Costa de. Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2. 2017. 53f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2017.https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/23708O clopidogrel é um fármaco utilizado na terapia para prevenção de trombose e aterosclerose. Contudo, a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel é um potencial efeito adverso relacionado com lesões hepáticas e resposta antiplaquetária. Considerando a falta de diagnóstico precoce para esse efeito adverso, miRNAs derivados de exossomos podem ser úteis para contribuir para o monitoramento da resposta antiplaquetária e na predição do risco de hepatotoxicidade. Portanto, primeiramente objetivamos investigar as interações miRNA-mRNA com a toxicidade do fármaco in silico utilizando dados de microarrays disponíveis e software Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA). Em seguida, o perfil de expressão exossomal dos miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p e miR-4701-3p, bem como os mRNAs alvos (PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB e TLK1) derivados de células foram avaliadas in vitro, uma vez que estes foram os alvos moleculares principalmente associados ao efeito adverso. Assim, células HepG2 foram incubadas com clopidogrel a 6,25, 12,5, 25, 50 e 100 μM durante 24 e 48 h. A citotoxicidade foi avaliada por citometria de fluxo pela análise da fragmentação do DNA e do ciclo celular. A expressão de miRNA derivados de exossomos e de mRNA derivados de células foi avaliado pela RT-qPCR. As células tratadas com concentrações mais elevadas de 50 e 100 μM causaram maior fragmentação do DNA após 24 e 48 h sugerindo ser uma concentração tóxica. A expressão do miR-26a-5p foi elevada e a expressão do miR-15b-5p foi diminuída na concentração tóxica 100 μM em relação ao controle em 24 e 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB e SENP5 alvos do miR-26a-5p foram pouco expressos nas concentrações tóxicas em 24 h e o HMGA2 se manteve pouco expresso depois de 48 h de tratamento, em relação ao controle. TLK1, alvo do miR-15b-5p, teve expressão diminuída em 24 h na concentração tóxica. Os resultados sugerem que concentrações tóxicas de clopidogrel podem modular a expressão de miR-26a-5p e miR-15b-5p e seus alvos de mRNA. Além disso, o miR-26a pode representar um marcador importante para prever a hepatotoxicidade induzida por clopidogrelClopidogrel is an essential therapy for prevention of thrombosis and atherosclerosis. However, clopidogrel-induced hepatotoxicity is a potential adverse effect related to liver damage and antiplatelet response. Considering the lack of diagnostic for this adverse effect, new exosomes-derived miRNAs may be useful for improve the monitoring of response and hepatotoxicity risk. Therefore, we first aimed to investigate the miRNA-mRNA interactions with drug toxicity by in silico using available microarray data and Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA) software. After, the exosomal-expression profile of miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p and miR-4701-3p, as well as the cell-derived mRNAs target PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB and TLK1 were evaluated in vitro, once they were the molecular targets mainly associated with the adverse effect. Thus, HepG2 cells were incubated with clopidogrel at 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 μM for 24 and 48 h. The cytotoxicity was evaluated by flow cytometry to analyze DNA fragmentation and cell cycle. Profile expression of exosomes-derived miRNAs obtained by column methods and cell-derived mRNAs was evaluated by RT-qPCR. Cells treated with higher concentrations of 50 and 100 μM caused an increased DNA fragmentation after 24 and 48 h suggesting a toxic concentration for the cells. The miR-26a-5p upregulation in toxic concentration of 100 μM of clopidogrel and a downregulation of miR-15b-5p in comparison to control were observed in both period of 24 and 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB and SNP5 targets of miR-26a-5p were downregulated in toxic concentrations at 24 h and HMGA2 remains downregulated after 48 h of clopidogrel treatment. TLK1, a target of miR-15b-5p, was downregulated at 24 h in toxic concentration. The results are suggestive that toxic concentrations of clopidogrel may modulate the miR-26a-5p and miR-15b-5p expression and their mRNA targets. Moreover, miR-26a may represent an important marker to predict clopidogrel-induced hepatotoxicity.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)porCNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIATerapia antiplaquetáriaIn vitroBiomarcadoresHepatotoxicidadeAvaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICASUFRNBrasilinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFRNinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)instacron:UFRNORIGINALAvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdfAvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdfapplication/pdf1605584https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/1/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf77e2de0b9595a498e99b9915306803afMD51TEXTRenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.txtRenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.txtExtracted texttext/plain85610https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/4/RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.txt66e00f2d7d2531f0c74234eab3ac852dMD54AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.txtAvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.txtExtracted texttext/plain85584https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/6/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.txt553185c779e825b42680629e7d8fa2f4MD56THUMBNAILRenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.jpgRenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg2683https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/5/RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.jpg2398038d5fae39adecd47eae1f3e9b7cMD55AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.jpgAvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1311https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/7/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.jpg0ccc1e98f7ad5516068087eedc82a094MD57123456789/237082019-05-26 02:59:25.381oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/23708Repositório de PublicaçõesPUBhttp://repositorio.ufrn.br/oai/opendoar:2019-05-26T05:59:25Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
title |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
spellingShingle |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 Freitas, Renata Caroline Costa de CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA Terapia antiplaquetária In vitro Biomarcadores Hepatotoxicidade |
title_short |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
title_full |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
title_fullStr |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
title_full_unstemmed |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
title_sort |
Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2 |
author |
Freitas, Renata Caroline Costa de |
author_facet |
Freitas, Renata Caroline Costa de |
author_role |
author |
dc.contributor.authorID.pt_BR.fl_str_mv |
|
dc.contributor.authorLattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/7118101315881678 |
dc.contributor.advisorID.pt_BR.fl_str_mv |
|
dc.contributor.advisorLattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/4420863418928278 |
dc.contributor.referees1.none.fl_str_mv |
Rezende, Adriana Augusto de |
dc.contributor.referees1ID.pt_BR.fl_str_mv |
|
dc.contributor.referees1Lattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/4245215108740331 |
dc.contributor.referees2.none.fl_str_mv |
Hirata, Mário Hiroyuki |
dc.contributor.referees2ID.pt_BR.fl_str_mv |
|
dc.contributor.referees2Lattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/8551642748793896 |
dc.contributor.referees3.none.fl_str_mv |
Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de |
dc.contributor.referees3ID.pt_BR.fl_str_mv |
|
dc.contributor.referees3Lattes.none.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/5882662534904226 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Freitas, Renata Caroline Costa de |
dc.subject.cnpq.fl_str_mv |
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA |
topic |
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA Terapia antiplaquetária In vitro Biomarcadores Hepatotoxicidade |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Terapia antiplaquetária In vitro Biomarcadores Hepatotoxicidade |
description |
O clopidogrel é um fármaco utilizado na terapia para prevenção de trombose e aterosclerose. Contudo, a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel é um potencial efeito adverso relacionado com lesões hepáticas e resposta antiplaquetária. Considerando a falta de diagnóstico precoce para esse efeito adverso, miRNAs derivados de exossomos podem ser úteis para contribuir para o monitoramento da resposta antiplaquetária e na predição do risco de hepatotoxicidade. Portanto, primeiramente objetivamos investigar as interações miRNA-mRNA com a toxicidade do fármaco in silico utilizando dados de microarrays disponíveis e software Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA). Em seguida, o perfil de expressão exossomal dos miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p e miR-4701-3p, bem como os mRNAs alvos (PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB e TLK1) derivados de células foram avaliadas in vitro, uma vez que estes foram os alvos moleculares principalmente associados ao efeito adverso. Assim, células HepG2 foram incubadas com clopidogrel a 6,25, 12,5, 25, 50 e 100 μM durante 24 e 48 h. A citotoxicidade foi avaliada por citometria de fluxo pela análise da fragmentação do DNA e do ciclo celular. A expressão de miRNA derivados de exossomos e de mRNA derivados de células foi avaliado pela RT-qPCR. As células tratadas com concentrações mais elevadas de 50 e 100 μM causaram maior fragmentação do DNA após 24 e 48 h sugerindo ser uma concentração tóxica. A expressão do miR-26a-5p foi elevada e a expressão do miR-15b-5p foi diminuída na concentração tóxica 100 μM em relação ao controle em 24 e 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB e SENP5 alvos do miR-26a-5p foram pouco expressos nas concentrações tóxicas em 24 h e o HMGA2 se manteve pouco expresso depois de 48 h de tratamento, em relação ao controle. TLK1, alvo do miR-15b-5p, teve expressão diminuída em 24 h na concentração tóxica. Os resultados sugerem que concentrações tóxicas de clopidogrel podem modular a expressão de miR-26a-5p e miR-15b-5p e seus alvos de mRNA. Além disso, o miR-26a pode representar um marcador importante para prever a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel |
publishDate |
2017 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2017-08-07T12:11:18Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2017-08-07T12:11:18Z |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2017-06-16 |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
FREITAS, Renata Caroline Costa de. Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2. 2017. 53f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2017. |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/23708 |
identifier_str_mv |
FREITAS, Renata Caroline Costa de. Avaliação da expressão de miRNAs exossomais na toxicidade hepática induzida pelo clopidogrel em células HepG2. 2017. 53f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2017. |
url |
https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/23708 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
UFRN |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
Brasil |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFRN instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) instacron:UFRN |
instname_str |
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) |
instacron_str |
UFRN |
institution |
UFRN |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFRN |
collection |
Repositório Institucional da UFRN |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/1/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/4/RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.txt https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/6/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.txt https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/5/RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf.jpg https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/23708/7/AvaliacaoExpressaoMiRNAs_Freitas_2017.pdf.jpg |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
77e2de0b9595a498e99b9915306803af 66e00f2d7d2531f0c74234eab3ac852d 553185c779e825b42680629e7d8fa2f4 2398038d5fae39adecd47eae1f3e9b7c 0ccc1e98f7ad5516068087eedc82a094 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1802117689088409600 |