Diversidade genética da sequência 18S do DNA ribossomal de Theileria equi em equinos oriundos das cinco regiões geográficas do Brasil

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vitari, Gabriela Lopes Vivas
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ
Texto Completo: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9614
Resumo: A piroplasmose equina, causada pelo hemoparasito Theileria equi, é endêmica no Brasil e é considerada uma das principais doenças de equinos no mundo. O objetivo do presente estudo foi investigar a diversidade genética de isolados geograficamente distintos de sequências do gene 18S rRNA de T. equi em equinos naturalmente infectados provenientes das cinco regiões do Brasil, caracterizar as regiões hipervariáveis das sequências 18S rRNA de T. equi deste estudo e elucidar as relações taxonômicas entre os isolados de T. equi do Brasil e do mundo. As amostras de sangue dos equinos foram coletadas nas cinco regiões do país. O DNA genômico foi extraído e as amostras foram submetidas a PCR em tempo real para a seleção das amostras positivas. Posteriormente, as amostras selecionadas foram submetidas a PCR convencional para a amplificação do gene 18S rRNA (~1600 pb) de T. equi, sendo os produtos sequenciados. As sequências foram alinhadas utilizando o ClustalW, e o alinhamento foi submetido ao método de reconstrução da Máxima Verossimilhança com distâncias moleculares estimadas pelo General Time Reversible Model, utilizando 1000 repetições. Desse alinhamento foi desenvolvida uma matriz de similaridade e foram observadas as regiões hipervariáveis. As análises filogenéticas foram realizadas de três formas distintas: utilizando sequências de T. equi do Brasil, utilizando sequências de diferentes espécies de Theileria e Babesia, e utilizando sequências de T. equi provenientes de todo o mundo. Foram obtidas vinte e três sequências parciais do gene 18S rRNA de T. equi, sendo treze delas variantes únicas do gene no Brasil. As regiões do gene hipervariáveis V2, V4 e V8 foram identificadas nas amostras do estudo, sendo a V4 a mais variável. Essas regiões hipervariáveis foram confirmadas pela análise de entropia. Foram identificados dois genótipos distintos circulantes nas regiões do Brasil. Apenas na região Norte foi observado um único genótipo, enquanto que nas demais regiões observaram-se ambos. As amostras se agruparam em dois clados (A e C), estando a maioria das sequências do estudo agrupadas no clado C. Em outra árvore, todas as sequências de T. equi se agrupam dentro do grupo 1, diferente das demais theilerias e babesias, presentes nos grupos 2 e 3. Em relação às amostras de T. equi do mundo, três clados foram observados: A, B e C. Este estudo acrescenta importantes informações sobre a diversidade gênica de T. equi em equinos de todas as regiões do Brasil baseado na sequência 18S rRNA.
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spelling Vitari, Gabriela Lopes VivasSantos, Huarrisson Azevedo983.833.295-04Massard, Carlos Luiz257.781.297-34Santos, Huarrisson AzevedoSouza, Aline Moreira deBaldani, Cristiane DivanAlmosny, Nádia Regina PereiraSantos, Tiago Marques dos119.780.147-24http://lattes.cnpq.br/41923722538567712023-12-21T18:41:58Z2023-12-21T18:41:58Z2018-03-28VITARI, Gabriela Lopes Vivas. Diversidade genética da sequência 18S do DNA ribossomal de Theileria equi em equinos oriundos das cinco regiões geográficas do Brasil. 2018. 60 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2018.https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9614A piroplasmose equina, causada pelo hemoparasito Theileria equi, é endêmica no Brasil e é considerada uma das principais doenças de equinos no mundo. O objetivo do presente estudo foi investigar a diversidade genética de isolados geograficamente distintos de sequências do gene 18S rRNA de T. equi em equinos naturalmente infectados provenientes das cinco regiões do Brasil, caracterizar as regiões hipervariáveis das sequências 18S rRNA de T. equi deste estudo e elucidar as relações taxonômicas entre os isolados de T. equi do Brasil e do mundo. As amostras de sangue dos equinos foram coletadas nas cinco regiões do país. O DNA genômico foi extraído e as amostras foram submetidas a PCR em tempo real para a seleção das amostras positivas. Posteriormente, as amostras selecionadas foram submetidas a PCR convencional para a amplificação do gene 18S rRNA (~1600 pb) de T. equi, sendo os produtos sequenciados. As sequências foram alinhadas utilizando o ClustalW, e o alinhamento foi submetido ao método de reconstrução da Máxima Verossimilhança com distâncias moleculares estimadas pelo General Time Reversible Model, utilizando 1000 repetições. Desse alinhamento foi desenvolvida uma matriz de similaridade e foram observadas as regiões hipervariáveis. As análises filogenéticas foram realizadas de três formas distintas: utilizando sequências de T. equi do Brasil, utilizando sequências de diferentes espécies de Theileria e Babesia, e utilizando sequências de T. equi provenientes de todo o mundo. Foram obtidas vinte e três sequências parciais do gene 18S rRNA de T. equi, sendo treze delas variantes únicas do gene no Brasil. As regiões do gene hipervariáveis V2, V4 e V8 foram identificadas nas amostras do estudo, sendo a V4 a mais variável. Essas regiões hipervariáveis foram confirmadas pela análise de entropia. Foram identificados dois genótipos distintos circulantes nas regiões do Brasil. Apenas na região Norte foi observado um único genótipo, enquanto que nas demais regiões observaram-se ambos. As amostras se agruparam em dois clados (A e C), estando a maioria das sequências do estudo agrupadas no clado C. Em outra árvore, todas as sequências de T. equi se agrupam dentro do grupo 1, diferente das demais theilerias e babesias, presentes nos grupos 2 e 3. Em relação às amostras de T. equi do mundo, três clados foram observados: A, B e C. Este estudo acrescenta importantes informações sobre a diversidade gênica de T. equi em equinos de todas as regiões do Brasil baseado na sequência 18S rRNA.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoEquine piroplasmosis, caused by the hemoparasite Theileria equi, is endemic in Brazil and is considered one of the major equine diseases in the world. The objective of the present study was to investigate the genetic diversity of geographically distinct isolates of 18S rRNA gene sequences of T. equi in naturally infected horses from the five Brazilian regions, characterize the hypervariable regions of the T. equi 18S rRNA sequences from this study and to elucidate the taxonomic relationships between T. equi isolates from Brazil and of the world. Equine blood samples were collected in the five regions of the country. The genomic DNA was extracted and the samples were submitted to real-time PCR for the selection of positive samples. Subsequently, the selected samples were submitted to a conventional PCR for amplification of the 18S rRNA gene (~1600 bp) of T equi, the products being sequenced. The sequences were aligned using ClustalW, and the alignment was submitted to the Maximum Likelihood reconstruction method with molecular distances estimated by the General Time Reversible Model, using 1000 replicates. From this alignment a similarity matrix was developed and the hypervariable regions were observed. Phylogenetic analyzes were performed in three different ways: using T. equi sequences from Brazil, using sequences from different species of Theileria and Babesia, and using T. equi sequences from all over the world. Twenty-three partial sequences of the 18S rRNA gene of T. equi were obtained, of which thirteen were unique variants of the gene in Brazil. The hypervariable gene regions V2, V4 and V8 were identified in the study samples, with V4 being the most variable. These hypervariable regions were confirmed by entropy analysis. Two distinct genotypes circulating in the Brazilian regions were identified. Only a single genotype was observed in the North region, while in the other regions both were observed. Samples were grouped into two clades (A and C), most of the study sequences being clustered in clade C. In another tree, all T. equi sequences grouped into group 1, different from the other theilerias and babesias, present in groups 2 and 3. In relation to the T. equi samples of the world, three clades were observed: A, B and C. This study adds important information on the genetic diversity of T. equi in horses from all regions of Brazil based on the 18S rRNA sequence.application/pdfporUniversidade Federal Rural do Rio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Ciências VeterináriasUFRRJBrasilInstituto de VeterináriaPiroplasmose equinadoença transmitida por carrapatoregião hipervariávelgenótiposentropiaEquine piroplasmosistick-borne diseasehypervariable regiongenotypesentropyBiologia GeralGenéticaDiversidade genética da sequência 18S do DNA ribossomal de Theileria equi em equinos oriundos das cinco regiões geográficas do BrasilGenetic diversity of the 18S sequence of ribosomal DNA of Theileria equi in horses from the five geographic regions of Brazilinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisABEDI, V.; RAZMI, G.; SEIFI, H.; NAGHIBI, A. Molecular and serological detection of Theileria equi and Babesia caballi infection in horses and ixodid ticks in Iran. 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description A piroplasmose equina, causada pelo hemoparasito Theileria equi, é endêmica no Brasil e é considerada uma das principais doenças de equinos no mundo. O objetivo do presente estudo foi investigar a diversidade genética de isolados geograficamente distintos de sequências do gene 18S rRNA de T. equi em equinos naturalmente infectados provenientes das cinco regiões do Brasil, caracterizar as regiões hipervariáveis das sequências 18S rRNA de T. equi deste estudo e elucidar as relações taxonômicas entre os isolados de T. equi do Brasil e do mundo. As amostras de sangue dos equinos foram coletadas nas cinco regiões do país. O DNA genômico foi extraído e as amostras foram submetidas a PCR em tempo real para a seleção das amostras positivas. Posteriormente, as amostras selecionadas foram submetidas a PCR convencional para a amplificação do gene 18S rRNA (~1600 pb) de T. equi, sendo os produtos sequenciados. As sequências foram alinhadas utilizando o ClustalW, e o alinhamento foi submetido ao método de reconstrução da Máxima Verossimilhança com distâncias moleculares estimadas pelo General Time Reversible Model, utilizando 1000 repetições. Desse alinhamento foi desenvolvida uma matriz de similaridade e foram observadas as regiões hipervariáveis. As análises filogenéticas foram realizadas de três formas distintas: utilizando sequências de T. equi do Brasil, utilizando sequências de diferentes espécies de Theileria e Babesia, e utilizando sequências de T. equi provenientes de todo o mundo. Foram obtidas vinte e três sequências parciais do gene 18S rRNA de T. equi, sendo treze delas variantes únicas do gene no Brasil. As regiões do gene hipervariáveis V2, V4 e V8 foram identificadas nas amostras do estudo, sendo a V4 a mais variável. Essas regiões hipervariáveis foram confirmadas pela análise de entropia. Foram identificados dois genótipos distintos circulantes nas regiões do Brasil. Apenas na região Norte foi observado um único genótipo, enquanto que nas demais regiões observaram-se ambos. As amostras se agruparam em dois clados (A e C), estando a maioria das sequências do estudo agrupadas no clado C. Em outra árvore, todas as sequências de T. equi se agrupam dentro do grupo 1, diferente das demais theilerias e babesias, presentes nos grupos 2 e 3. Em relação às amostras de T. equi do mundo, três clados foram observados: A, B e C. Este estudo acrescenta importantes informações sobre a diversidade gênica de T. equi em equinos de todas as regiões do Brasil baseado na sequência 18S rRNA.
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