Avaliação do perfil protéico da postura de fêmeas de Rhipicephalus microplus infectadas por Metarhizium anisopliae.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gôlo, Patrícia Silva
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ
Texto Completo: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11940
Resumo: Os danos econômicos causados pelo carrapato Rhipicephalus microplus faz desse parasito um importante alvo de pesquisas. O seu controle é realizado, principalmente, com acaricidas químicos. A utilização de fungos para controlar carrapatos é uma escolha interessante uma vez que os fungos apresentam boa capacidade de dispersão, capacidade de penetrar via cutícula dos carrapatos e algumas cepas específicas para artrópodes, contribuindo para a preservação de organismos não-alvo. Estudos relacionados ao processo de infecção fúngica, sua repercussão na maturação dos oócitos e disponibilização de nutrientes para o embrião são aspectos importantes para se compreender melhor os efeitos desta infecção em carrapatos, contribuindo para avanço no controle deste ectoparasito. Dentro deste contexto, o presente trabalho avaliou as possíveis alterações no perfil proteico da postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae s.l. Cinco grupos (quatro tratados com M. anisopliae s.l. e um grupo controle), contendo 50 fêmeas cada, foram utilizados no bioensaio que consistiu na imersão das fêmeas nas concentrações conidiais (1 × 108, 1 × 107, 1 × 106 ou 1 × 105 conídios/mL) ou em água destilada estéril acrescida de Tween 80 0,1% (grupo controle) por três minutos. A postura diária de cada grupo foi separada e armazenada individualmente, durante 10 dias. Essas massas de ovos foram homogeneizadas separadamente, maceradas em tampão de lise celular e centrifugadas. O conteúdo protéico do sobrenadante foi determinado pelo método de Lowry modificado. O perfil proteico da postura diária foi analisado por SDS-PAGE 12. Não houve diferença estatisticamente significativa (p ≤ 0,05) quando o conteúdo proteico do grupo controle foi comparado com o dos grupos tratados. Na análise dos géis foram evidenciadas 19 bandas protéicas. Não foi observada diferença no perfil de bandas entre o grupo controle e os grupos tratados, bem como na comparação entre os perfis dos grupos tratados. Uma análise cromatográfica foi realizada para avaliação das possíveis diferenças entre os peptídeos presentes na postura de fêmeas do grupo tratado com 1 × 108 conídios/mL e o grupo controle. Cada amostra foi pré-purificada em três concentrações de acetonitrila (ACN) (5, 40 e 80%). Após concentradas, foram submetidas à Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando uma coluna analítica de fase reversa tipo C18. A atividade antimicrobiana das frações coletadas foi testada contra Candida albicans e M. anisopliae s.l. Nove amostras reduziram o crescimento de C. albicans em mais de 35%. O pico que apresentou maior atividade antimicrobiana contra a levedura pertenceu ao oitavo dia de postura do grupo infectado. Este pico resultou da pré-purificação em 5% de ACN e não foi observado em nenhum outro cromatograma. Este pico foi responsável por, em média, 80,94% de redução no crescimento da levedura. Não houve atividade microbiana destas amostras contra M. anisopliae s.l. O presente trabalho reporta, pela primeira vez, resposta induzida na postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico M. anisopliae s.l.
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spelling Gôlo, Patrícia SilvaBittencourt, Vânia Rita Elias Pinheiro505.198.676-53http://lattes.cnpq.br/3888832724995864Salles, Cristiane Martins Cardoso deFernandes, Everton Kort KampPontes, Emerson Guedes058.507.577-83http://lattes.cnpq.br/39352757429190972023-12-22T01:59:10Z2023-12-22T01:59:10Z2011-08-19GÔLO, Patrícia Silva. Avaliação do perfil protéico da postura de fêmeas de Rhipicephalus microplus infectadas por Metarhizium anisopliae. 2011. 71 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica.https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11940Os danos econômicos causados pelo carrapato Rhipicephalus microplus faz desse parasito um importante alvo de pesquisas. O seu controle é realizado, principalmente, com acaricidas químicos. A utilização de fungos para controlar carrapatos é uma escolha interessante uma vez que os fungos apresentam boa capacidade de dispersão, capacidade de penetrar via cutícula dos carrapatos e algumas cepas específicas para artrópodes, contribuindo para a preservação de organismos não-alvo. Estudos relacionados ao processo de infecção fúngica, sua repercussão na maturação dos oócitos e disponibilização de nutrientes para o embrião são aspectos importantes para se compreender melhor os efeitos desta infecção em carrapatos, contribuindo para avanço no controle deste ectoparasito. Dentro deste contexto, o presente trabalho avaliou as possíveis alterações no perfil proteico da postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae s.l. Cinco grupos (quatro tratados com M. anisopliae s.l. e um grupo controle), contendo 50 fêmeas cada, foram utilizados no bioensaio que consistiu na imersão das fêmeas nas concentrações conidiais (1 × 108, 1 × 107, 1 × 106 ou 1 × 105 conídios/mL) ou em água destilada estéril acrescida de Tween 80 0,1% (grupo controle) por três minutos. A postura diária de cada grupo foi separada e armazenada individualmente, durante 10 dias. Essas massas de ovos foram homogeneizadas separadamente, maceradas em tampão de lise celular e centrifugadas. O conteúdo protéico do sobrenadante foi determinado pelo método de Lowry modificado. O perfil proteico da postura diária foi analisado por SDS-PAGE 12. Não houve diferença estatisticamente significativa (p ≤ 0,05) quando o conteúdo proteico do grupo controle foi comparado com o dos grupos tratados. Na análise dos géis foram evidenciadas 19 bandas protéicas. Não foi observada diferença no perfil de bandas entre o grupo controle e os grupos tratados, bem como na comparação entre os perfis dos grupos tratados. Uma análise cromatográfica foi realizada para avaliação das possíveis diferenças entre os peptídeos presentes na postura de fêmeas do grupo tratado com 1 × 108 conídios/mL e o grupo controle. Cada amostra foi pré-purificada em três concentrações de acetonitrila (ACN) (5, 40 e 80%). Após concentradas, foram submetidas à Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando uma coluna analítica de fase reversa tipo C18. A atividade antimicrobiana das frações coletadas foi testada contra Candida albicans e M. anisopliae s.l. Nove amostras reduziram o crescimento de C. albicans em mais de 35%. O pico que apresentou maior atividade antimicrobiana contra a levedura pertenceu ao oitavo dia de postura do grupo infectado. Este pico resultou da pré-purificação em 5% de ACN e não foi observado em nenhum outro cromatograma. Este pico foi responsável por, em média, 80,94% de redução no crescimento da levedura. Não houve atividade microbiana destas amostras contra M. anisopliae s.l. O presente trabalho reporta, pela primeira vez, resposta induzida na postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico M. anisopliae s.l.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES, Brasil.Rhipicephalus microplus ticks are an important research target because it causes severe economic losses. Parasite control, in general, is based on the use of chemical acaricides. Entomopathogenic fungi are potential candidates as biocontrol agents due to its dispersibility, its ability to penetrate through the arthropods’s cuticle and the relatively specificity to arthropods, contributing to the preservation of non-target organisms. Therefore, studies of fungal infection mechanism and of the effects of the infection on oocytes maturation and on nutrients availability to the embryo are aspects demanded to be explored for further comprehension of the fungi infection, as well as, the ticks’ defense mechanisms. These investigations would significantly contribute to advances in tick control. The present study evaluates possible changes in the protein profile of eggs layed by R. microplus females infected with the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae s.l. Ma 959 isolate. Bioassay was composed by five groups: four groups treated with M. anisopliae s.l. and one control group. Each group lead 50 females. Ticks were immersed in 1 ml of 0.1% Tween 80 aqueous conidial suspension at 1×108, 1 × 107, 1 × 106 or 1 × 105 conidia ml−1 for three minutes. The control group was immersed in 1 ml of 0.1% Tween 80 aqueous solution with no conidia. Eggs were separated daily, for the first ten days of oviposition and stored at – 20°C. Egg masses were separately homogenized, ground with lyses buffer and centrifuged. The protein content of supernatant was determined by the method of Lowry with modifications. Samples were analyzed through a 12%-polyacrylamide electrophoresis gel under denaturing conditions (SDS-PAGE). There was no significant (p ≤ 0.05) difference in the total protein content between the eggs from infected and non-infected groups. Nineteen protein bands were observed on the SDS-PAGE. No difference was observed in the bands profile between the control and the infected groups. In adition, no differences was observed in the profiles of groups treated with different concentrations of conidia. Eggs from females infected with the highest fungal concentration or from non-infected females were used for HPLC analysis. Samples were pre-purified by solid phase extraction. Elution steps were performed with 5, 40, and 80% acetonitrile (ACN). Samples were then submitted to a HPLC using an analytic C18 reverse-phase column. The antimicrobial activity of samples collected by HPLC was tested against Candida albicans and M. anisopliae s.l. Nine samples reduced C. albicans growth over than 35%. The fraction with the highest antimicrobial activity to C. albicans was collected from eggs from day 8 of oviposition of infected engorged females. This fraction was pre-purified in 5% of ACN, caused 80.94% reduction of growth of C. albicans and was not observed in any other chromatogram. There was no antimicrobial activity against M. anisopliae s.l. The present study reportes, for the first time, induced response in eggs from R. microplus females infected by the entomopathogenic fungus M. anisopliae s.l.application/pdfporUniversidade Federal Rural do Rio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Ciências VeterináriasUFRRJBrasilInstituto de Veterináriafungos entomopatogênicoscarrapatosatividade antimicrobianaovosentomopathogenic fungiticksantimicrobial activityeggsMedicina VeterináriaAvaliação do perfil protéico da postura de fêmeas de Rhipicephalus microplus infectadas por Metarhizium anisopliae.Protein profile of eggs from Rhipicephalus microplus ticks infected by Metarhizium anisopliae.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisALONSO-DIAZ, M.A., GARCIA, L., GALINDO-VELASCO, E., LEZAMA-GUTIERREZ, R., ANGEL SAHAGUN, C.A., RODRIGUEZ-VIVAS, R.I., FRAGOSO-SANCHEZ, H. 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description Os danos econômicos causados pelo carrapato Rhipicephalus microplus faz desse parasito um importante alvo de pesquisas. O seu controle é realizado, principalmente, com acaricidas químicos. A utilização de fungos para controlar carrapatos é uma escolha interessante uma vez que os fungos apresentam boa capacidade de dispersão, capacidade de penetrar via cutícula dos carrapatos e algumas cepas específicas para artrópodes, contribuindo para a preservação de organismos não-alvo. Estudos relacionados ao processo de infecção fúngica, sua repercussão na maturação dos oócitos e disponibilização de nutrientes para o embrião são aspectos importantes para se compreender melhor os efeitos desta infecção em carrapatos, contribuindo para avanço no controle deste ectoparasito. Dentro deste contexto, o presente trabalho avaliou as possíveis alterações no perfil proteico da postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae s.l. Cinco grupos (quatro tratados com M. anisopliae s.l. e um grupo controle), contendo 50 fêmeas cada, foram utilizados no bioensaio que consistiu na imersão das fêmeas nas concentrações conidiais (1 × 108, 1 × 107, 1 × 106 ou 1 × 105 conídios/mL) ou em água destilada estéril acrescida de Tween 80 0,1% (grupo controle) por três minutos. A postura diária de cada grupo foi separada e armazenada individualmente, durante 10 dias. Essas massas de ovos foram homogeneizadas separadamente, maceradas em tampão de lise celular e centrifugadas. O conteúdo protéico do sobrenadante foi determinado pelo método de Lowry modificado. O perfil proteico da postura diária foi analisado por SDS-PAGE 12. Não houve diferença estatisticamente significativa (p ≤ 0,05) quando o conteúdo proteico do grupo controle foi comparado com o dos grupos tratados. Na análise dos géis foram evidenciadas 19 bandas protéicas. Não foi observada diferença no perfil de bandas entre o grupo controle e os grupos tratados, bem como na comparação entre os perfis dos grupos tratados. Uma análise cromatográfica foi realizada para avaliação das possíveis diferenças entre os peptídeos presentes na postura de fêmeas do grupo tratado com 1 × 108 conídios/mL e o grupo controle. Cada amostra foi pré-purificada em três concentrações de acetonitrila (ACN) (5, 40 e 80%). Após concentradas, foram submetidas à Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando uma coluna analítica de fase reversa tipo C18. A atividade antimicrobiana das frações coletadas foi testada contra Candida albicans e M. anisopliae s.l. Nove amostras reduziram o crescimento de C. albicans em mais de 35%. O pico que apresentou maior atividade antimicrobiana contra a levedura pertenceu ao oitavo dia de postura do grupo infectado. Este pico resultou da pré-purificação em 5% de ACN e não foi observado em nenhum outro cromatograma. Este pico foi responsável por, em média, 80,94% de redução no crescimento da levedura. Não houve atividade microbiana destas amostras contra M. anisopliae s.l. O presente trabalho reporta, pela primeira vez, resposta induzida na postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico M. anisopliae s.l.
publishDate 2011
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