Clonagem gênica, expresão heteróloga e proposição de um modelo estrutural teórico para a polihidroxialcanoato sintase de chromobacterium violaceum
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Data de Publicação: | 2007 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFSC |
Texto Completo: | http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/90603 |
Resumo: | Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia |
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Universidade Federal de Santa CatarinaBressan, Cléo RodrigoPorto, Luismar MarquesPedrosa, Rozangela Curi2012-10-23T12:49:27Z2012-10-23T12:49:27Z20072007240338http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/90603Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em BiotecnologiaVisando ao desenvolvimento de um sistema heterólogo para produção de polihidroxialcanoatos (PHA) em Escherichia coli, clonou-se o gene da enzima PHA sintase de Chromobacterium violaceum (phaCCv) no plasmídeo pBHR69, o qual continha previamente os genes para as enzimas ß-cetotiolase (phbA) e acetoacetil-CoA redutase (phbB) do operon de Cupriavidus necator, ambas necessárias, juntamente com a PHA sintase, para a biossíntese de PHA em E. coli. Para verificação da produção de polímero em E. coli foram transformadas com o plasmídeo obtido (pRLC2) as linhagens JM101 e DH5a. Em cultivos não otimizados utilizando glicose como substrato obteve-se 1,15 e 1,52 g l-1 de biomassa com rendimento de 29,6 e 42,6 % de PHA do tipo poli(3-hidroxibutirato) nas linhagens JM101 e DH5a, respectivamente. Estes resultados evidenciaram que a PHA sintase de C. violaceum apresenta atividade aparentemente normal em E. coli, diferentemente do que sugeriram estudos anteriores, permitindo, portanto, a sua utilização para produção heteróloga de PHA nesta bactéria. O modelo estrutural teórico obtido para a enzima PhaCCv apresentou uma tríade catalítica similar à observada em lipases e outras enzimas da família a/ß-hidrolase, sugerindo que o resíduo de aspartato pertencente à tríade possa também estar associado à estabilização da ligação enzima-substrato. Assim como nas lipases, observou-se também no modelo a ocorrência de uma região possivelmente relacionada à ativação interfacial da enzima junto à superfície hidrofóbica do grânulo de PHA. As estruturas terciárias obtidas na modelagem estrutural sugerem a necessidade de reavaliação dos modelos mecanísticos de síntese atualmente propostos, uma vez que os mesmos pressupõem que o resíduo de aspartato não participaria da estabilização da ligação enzima-substrato, possuindo unicamente a função de ativação do radical hidroxila durante a biossíntese do polímero.ix, 63 f.| il., grafs., tabs.porFlorianópolis, SCBiotecnologiaChromobacterium violaceumClonagemPolihidroxialcanoatosSintase organicaClonagem gênica, expresão heteróloga e proposição de um modelo estrutural teórico para a polihidroxialcanoato sintase de chromobacterium violaceuminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINAL240338.pdfapplication/pdf5928151https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/90603/1/240338.pdf3ec335edd174d0f75509099b78fc544cMD51THUMBNAIL240338.pdf.jpg240338.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1154https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/90603/2/240338.pdf.jpge265da2663750bf9f2b199367b954ba5MD52123456789/906032013-04-30 14:40:16.128oai:repositorio.ufsc.br:123456789/90603Repositório de PublicaçõesPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732013-04-30T17:40:16Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false |
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