Persulfidação em proteína tirosina fosfatase A (PtpA) de Mycobacterium tuberculosis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ortiz, Karla Oliveira
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/226775
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2020.
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spelling Persulfidação em proteína tirosina fosfatase A (PtpA) de Mycobacterium tuberculosisBioquímicaSulfeto de hidrogênioMycobacterium tuberculosisTuberculoseDissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2020.A tuberculose, doença causada pela bactéria Mycobacterium tuberculosis, é uma das maiores causa global de mortes por infecção por um único patógeno. O sucesso da infeção do M. tuberculosis é devido a sua capacidade de evadir as respostas imunes do hospedeiro. Um dos fatores de virulência utilizados pela bactéria para sobreviver no interior dos macrófagos é a Proteína Tirosina Fosfatase A (PtpA). Trabalhos anteriores do grupo revelaram que essa enzima é modulada pelo gasotransmissor óxido nítrico (NO). Este trabalho buscou investigar o efeito do gasotransmissor sulfeto de hidrogênio (H2S), na forma de persulfidação de resíduos de cisteína, em PtpA de M. tuberculosis. A PtpA recombinante e seus mutantes de cisteína (C16A, C53A e C16/53A) foram expressos e purificados. As proteínas foram pré-incubadas na ausência e presença do doador de sulfeto de hidrogênio (NaSH) durante 30 min a 25oC, posteriormente submetidos aos devidos teste. Ensaios de espectrometrias de massas por ESI (ESI-MS) mostraram um aumento de massa de aproximadamente 32 Da na PtpA WT e C53A, quando tratados com sulfeto de hidrogênio. Porém, o mesmo aumento não foi observado nos outros mutantes, C16A e C16/53A. O H2S reduziu significativamente as atividades de PtpA WT e C53A. Este efeito não se repetiu nas mutantes sem o resíduo Cys16, corroborando o observado nas análises de massas. Em relação aos aspectos estruturais, a presença do doador de H2S não alterou a estabilidade térmica e o conteúdo de estruturas secundárias em nenhuma das proteínas, indicando que as mudanças na atividade enzimática não são efeitos de desnaturação proteica. Considerando os resultados obtidos, pode-se inferir que a presença de H2S em solução é capaz de modificar o resíduo de Cys16, interferindo na funcão da enzima e reduzindo sua atividade.Abstract: Tuberculosis, a disease caused by the bacterium Mycobacterium tuberculosis, is a major global cause of deaths from infection by a single pathogen. The success of M. tuberculosis infection is due to its ability to evade the host's immune responses. One of the virulence factors used by the bacteria to survive inside macrophages is Protein Tyrosine Phosphatase A (PtpA). Previous work by the group revealed that this enzyme is modulated by the nitric oxide (NO) gasotransmitter. This work investigates the effect of the hydrogen sulfide gasotransmitter (H2S), in the form of persulfidation of cysteine residues, in M. tuberculosis PtpA. Recombinant PtpA and its cysteine mutants (C16A, C53A and C16/53A) were expressed and purified. The proteins were pre-incubated in the absence and presence of the hydrogen sulfide donor (NaSH) for 30 min at 25oC, subsequently subjected to the appropriate tests. Mass spectrometry tests by ESI (ESI-MS) showed a mass increase of approximately 32 Da in PtpA WT and C53A, when treated with hydrogen sulfide. However, the same increase was not observed in the other mutants, C16A and C16/53A. H2S significantly reduced PtpA WT and C53A activities. This effect was not repeated in the mutants without the Cys16 residue, corroborating what was observed in the mass analysis. Regarding the structural aspects, the presence of the H2S donor did not alter the thermal stability and the content of secondary structures in any of the proteins, indicating that the changes in the enzymatic activity are not effects of protein denaturation. Considering the results obtained, it can be inferred that the presence of H2S in solution is capable of modifying the Cys16 residue, interfering with the functioning of the enzyme and reducing its activity.Terenzi, Hernán FranciscoUniversidade Federal de Santa CatarinaOrtiz, Karla Oliveira2021-08-23T14:00:22Z2021-08-23T14:00:22Z2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis70 p.| il., tabs.application/pdf372441https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/226775porreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2021-08-23T14:00:22Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/226775Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732021-08-23T14:00:22Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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