Estudo da produção de fragmento de anticorpo monoclonal scFv anti-Stx2 utilizando linhagens de Escherichia coli recombinante

• Autor(a) principal: Carvalho, Rafaela Vieira de [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/65456
• topic: STEC; Toxina Shiga; E. coli recombinante; Fragmento de anticorpo monoclonal scFv; Meio de cultura

Linhagens de Escherichia coli produtoras da toxina de Shiga (STEC) podem causar colite hemorrágica e síndrome hemolítico-urêmica pela produção da citotoxina de Shiga (Stx), uma toxina que inibe a síntese proteica por agir no rRNA, levando à morte celular. Por não existir antídoto disponível, a terapia atual envolve apenas o tratamento dos sintomas. Fragmentos de anticorpos monoclonais tem se tornado uma importante classe de biofármacos disponíveis atualmente, apresentando diversas vantagens sobre o anticorpo convencional, como seu tamanho reduzido, ideal para a produção em larga escala em sistemas microbianos, tecnologias de processamento robustas e escalabilidade para biorreatores de grande volume. Fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv contra toxinas Stx foram descritos possuindo atividade neutralizante para uso em diagnóstico e terapêutico contra STEC. O presente trabalho teve como objetivo estudar a obtenção do fragmento de anticorpo scFv anti-Stx2 variando-se os sistemas de expressão E. coli BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLysS e Arctic Express (DE3) recombinantes, e também realizar otimização do meio de cultura para obtenção de um maior rendimento do fragmento. De modo geral a linhagem Arctic se mostrou mais promissora para a obtenção do fragmento, contudo novos ensaios serão necessários para validação dos resultados obtidos. Além disso, adição de IPTG a 1 M e 2YT a 5g/L no momento na indução, resultou em um rendimento maior da proteína de interesse.