Caracterização de um plano plasmídio conjugativo de mycobacterium avium

• Autor(a) principal: Machado, Gabriel Esquitini [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3579620; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48297
• topic: Conjugativo pma100; Mycobacterium avium; Plasmídio; Origem de replicação; Conjugação genética; Micobactérias não tuberculosas

Objetivo: Caracterização do plasmídio conjugativo pMA100 de Mycobacterium avium, identificando sua origem de replicação e mecanismo de conjugação. Material e Métodos: A montagem e anotação de pMA100 foram realizadas aliadas a uma análise bioinformática e revisão da literatura para identificar e descrever os principais componentes desse plasmidio. Possíveis regiões contendo a origem de replicação de pMA100 foram identificadas, considerando as características de origens de replicação já descritas para outros plasmídios de micobactérias, e clonadas mediante a construção de plasmídios shuttle E. coli-Mycobacterium. Seis plasmídios recombinantes foram construídos, três envolvendo o gene rep1 e diferentes regiões a montante deste gene, e outros três envolvendo o gene rep2 e diferentes regiões a montante deste gene. Essas construções foram utilizadas na transformação de micobactérias de crescimento rápido (MCR) (M. smegmatis mc2155, M. abscessus ATCC 19977) e micobatérias de crescimento lento (MCL) (M. bovis BCG Moreau e Pasteur). Adicionalmente, um mecanismo de conjugação foi proposto com base na análise bioinformática de pMA100 e revisão da literatura sobre seus componentes. Resultados: A análise bioinformática revelou que o plasmídio pMA100 pertence a um grupo de plasmídios de MCL que se caracteriza pela presença de três regiões conservadas, relacionadas ao mecanismo de conjugação deste plasmídio: um locus do sistema de secreção tipo 4 (SST4), um locus do sistema de secreção tipo 7 (SST7) e um gene de exonuclease V. A existência de uma origem de replicação de pMA100 funcional em micobactérias foi comprovada em duas construções envolvendo o gene rep1: rep1-2539 e rep1-1708. A construção rep1-2539 gerou colônias transformantes em M. smegmatis mc2155, M. bovis BCG Moreau e Pasteur, enquanto que a construção rep1-1708 gerou colônias transformantes somente em M. smegmatis mc2155. Conclusões: O plasmídio pMA100 possui uma origem de replicação funcional na região a montante do gene rep1, e o processo de conjugação deste plasmídio possivelmente ocorre por um mecanismo inédito, envolvendo componentes do SST4, SST7 e a proteína exonuclease V.