Características clínico-laboratoriais, análise mutacional do gene PIG-A e perfil metabolômico em pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna

• Main Author: Yamakawa, Patricia Eiko [UNIFESP]
• Publication Date: 2019
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNIFESP
• Download full: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7731401; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59539
• topic: Hemoglobinúria Paroxística Noturna; PIG-A; Metabolômica; Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria; SIG-A; Metabolomics

Introdução: A hemoglobinúria paroxística noturna (HPN) é uma doença causada por uma anormalidade adquirida no gene da fosfatidilinositol glicano classe A (PIG-A), o que leva à deficiência parcial ou completa das proteínas de ancoragem ligadas ao glicosilfosfatidilinositol (GPI), como as proteínas reguladoras do complemento CD59 e CD55, resultando em um aumento na sensibilidade das hemácias à ação lítica do complemento. As manifestações clínicas incluem um espectro variável de anemia hemolítica, estado pró-trombótico, e hematopoese reduzida. Objetivo: 1) Analisar as características clínico-laboratoriais de 109 pacientes com HPN clássica, HPN associada a outra doença hematológica ou HPN subclínica; 2) Avaliar as mutações do gene PIG-A e possíveis correlações com as manifestações clínicas; 3) Comparar o perfil metabolômico dos pacientes com HPN hemolítica a controles saudáveis; e 4) Comparar o perfil metabolômico antes e após a aplicação de eculizumabe. Pacientes e métodos: Foram estudados 109 pacientes com clone HPN, sendo 56 portadores de HPN hemolítica (44 HPN clássica e 12 HPN associada a outra doença hematológica), e 53 HPN subclínica, definido como pelo menos 0,01% de células com clone HPN associado a outra doença hematológica (anemia aplásica em 95% dos casos). O sequenciamento do gene PIG-A pela técnica de Sanger foi realizado em 31 pacientes. Para avaliação do perfil metabolômico, foi realizado espectrometria de massa (Kit AbsoluteIDQ p180, Biocrates, Áustria) em 23 pacientes com HPN com hemólise significativa, comparados a 166 controles saudáveis. Foi ainda realizada avaliação antes e 24 horas após a dose de eculizumabe em 12 pacientes. A análise estatística foi feita através do software MetaboAnalyst 4.0. Resultados: Dos 109 pacientes incluídos, 51% eram do sexo masculino. A mediana de idade ao diagnóstico foi de 41 anos, variando de 18 a 81 anos. Dentre os pacientes com HPN hemolítica, 86% apresentavam fadiga, 66% hemoglobinúria, 45% dor abdominal e 16% disfagia. Tromboembolismo venoso foi observado em 14 casos (25%), sendo trombose abdominal em 7 casos (50%). Sete pacientes (13%) apresentaram trombose arterial (acidente vascular cerebral e acidente isquêmico transitório). Nos 31 pacientes analisados quanto a mutações do PIG-A, foram detectadas 29 variantes diferentes em 27 pacientes. Entre elas, 23 eram novas mutações, sem descrição prévia na literatura, 3 eram mutações já publicadas e 3 eram polimorfismos de nucleotídeo único. As mutações foram predominantemente de pequenas deleções e simples troca de bases. Não houve qualquer correlação entre as mutações encontradas e as manifestações clínicas dos pacientes. Os principais metabólitos aumentados nos pacientes com HPN foram acilcarnitinas de cadeia longa, enquanto os principais metabólitos reduzidos nos pacientes com HPN foram fosfatidilcolinas, histidina, glutamato, taurina e aspartato. A razão de C14:1/C16:1 mostrou-se um marcador confiável de HPN, sugerindo que há elongação dos lipídeos nesses pacientes, o que não acontece nos controles. Quando avaliamos pacientes imediatamente antes de receber eculizumabe e 24 horas após a administração do medicamento, notamos uma tendência a normalização na dosagem de C6:1 e nas razões C14:1/C6 e C4/C6, correspondentes a atividade de desidrogenases de acil-CoA de cadeia média e curta, respectivamente. Conclusão: Observamos que as características clínicas e a distribuição entre os três subtipos de HPN nesse grupo de portadores de HPN foram semelhantes às de outras séries da literatura, exceto por menores taxas de trombose, doença renal crônica e mortalidade. Foram detectadas mutações no PIG-A na maioria dos pacientes com HPN, sendo quase todas (exceto três) ainda não previamente descritas, não sendo observada correlação entre os tipos de mutação e a manifestação clínica. Encontramos diferenças nos metabólitos dos pacientes com HPN quando comparados aos controles saudáveis, sugerindo um perfil metabolômico próprio destes pacientes, além da tendência a normalização desses metabólitos após o uso de eculizumabe.