Análise do perfil de expressão gênica pela técnica de microarrays de oligonucleotídeos em subgrupos de pacientes com mieloma múltiplo definidos a partir de antígenos câncer/testículo
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Data de Publicação: | 2008 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/8926 |
Resumo: | Introducao: Antigenos cancer/testiculo (CT) tem se tornado o grupo de antigenos mais estudados no campo da imunoterapia contra o cancer. Objetivos: Este estudo avaliou a expressao global de 14 CTs em MM para identificar possiveis marcadores prognosticos e alvos terapeuticos. Materiais e metodos: A expressao de MAGEA1, MAGEA2, MAGEA3/6, MAGEA4, MAGEA10, MAGEA12, CT7, BAGE-1, GAGE (familia), NY-ESO-1, LAGE-1, SPA17, PRAME e SSX1 foi estudada pela RT-PCR em: 15 tecidos normais, um pool de 10 amostras de medula ossea (MO), tres amostras de plasmocitos obtidos de tonsilas palatinas normais, seis aspirados de MO de doadores, tres aspirados de MO de gamopatias monoclonais de significado indeterminado (GMSI), cinco aspirados de MO de plasmocitomas solitarios, 39 amostras de MO de MM (95% em estadio avancado) e em uma linhagem celular de MM (U266). A plataforma CodeLink Human UniSet I Bioarrays 10,000 genes foi utilizada para as analises de microarrays de oligonucleotideos. Os dados normalizados dos microarrays foram submetidos ao programa Pathway-Express, que identificou cinco genes da via de adesao focal (Crk, Src, ITGA5, RhoA e RhoD) para a validacao pela RQ-PCR. Resultados: A expressao do gene SPA17 foi positiva em todos os tecidos normais e por isso esse gene foi excluido de futuras analises. A expressao do CT7 foi positiva em amostras de MO de um caso de GMSI e um caso de plasmocitoma solitario. A linhagem celular U266 foi positiva para todos os CTs exceto SSX1. A frequencia dos CTs em amostras de MO total de pacientes com MM foi: CT7 = 30/39 (77%); LAGE-1 = 19/39 (49%); MAGEA3/6 = 16/39 (41%); MAGEA2 = 14/39 (36%); GAGE family = 13/39 (33%); NY-ESO-1 = 13/39 (33%); BAGE-1 = 12/39 (28%); MAGEA1 = 10/39 (26%); PRAME = 9/39 (23%); SSX-1 = 10/39 (26%); MAGEA12 = 8/39 (20.5%); MAGEA4 e MAGEA10 = 0%. O modelo de regressao de Cox mostrou que a positividade da familia GAGE e o numero de CTs > 6 sao fatores prognosticos desfavoraveis independentes para a sobrevida global (SG), quando todos os pacientes foram analisados. No entanto, a expressao de CT7 foi o unico fator prognostico desfavoravel para a SG quando apenas os pacientes nao transplantados foram analisados. Tres amostras de CTs predominantemente positivos (> 6) e tres amostras com expressao predominantemente negativa (0 ou 1) para os 13 CTs analisados foram submetidas aos microarrays de oligonucleotideos. Essa ferramenta identificou 147 genes como diferencialmente expressos nos dois grupos. A validacao dos genes candidatos da via de adesao focal por RQ-PCR mostrou que o gene ITGA5 foi hipoexpresso quando comparamos o grupo > 6 CTs versus grupo . 6 CTs (p= 0.0030). Quando a comparacao foi feita em plasmocitos tumorais versus plasmocitos normais, o gene ITGA5 manteve a hipo-expressao (p=0,0182) e o gene RhoD mosrou-se hiper-expresso (p= 0,0339). Conclusoes: Baseado em nossos achados, CT7, MAGEA3/6 e LAGE-1 parecem bons cadidatos a imunoterapia, visto que juntos foram expressos em 85% dos casos de MM. A expressao da familia GAGE, o numero de CTs > 6 e a expressao do CT7 parecem ter impacto desfavoravel na sobrevida global do MM. As analises com os microarrays sugeriram que ha dois grupos de pacientes com MM separados pela expressao dos CTs: grupo dos predominantemente positivos e predominantemente negativos. A validacao por RQ-PCR mostrou que a via de adesao focal parece estar afetada no MM, pois ITGA5 e RhoD foram encontrados diferencialmente expressos, o que sugere um desequilibrio nas moleculas que controlam a homeostasia dessa via. |
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Resultados: A expressao do gene SPA17 foi positiva em todos os tecidos normais e por isso esse gene foi excluido de futuras analises. A expressao do CT7 foi positiva em amostras de MO de um caso de GMSI e um caso de plasmocitoma solitario. A linhagem celular U266 foi positiva para todos os CTs exceto SSX1. A frequencia dos CTs em amostras de MO total de pacientes com MM foi: CT7 = 30/39 (77%); LAGE-1 = 19/39 (49%); MAGEA3/6 = 16/39 (41%); MAGEA2 = 14/39 (36%); GAGE family = 13/39 (33%); NY-ESO-1 = 13/39 (33%); BAGE-1 = 12/39 (28%); MAGEA1 = 10/39 (26%); PRAME = 9/39 (23%); SSX-1 = 10/39 (26%); MAGEA12 = 8/39 (20.5%); MAGEA4 e MAGEA10 = 0%. O modelo de regressao de Cox mostrou que a positividade da familia GAGE e o numero de CTs > 6 sao fatores prognosticos desfavoraveis independentes para a sobrevida global (SG), quando todos os pacientes foram analisados. No entanto, a expressao de CT7 foi o unico fator prognostico desfavoravel para a SG quando apenas os pacientes nao transplantados foram analisados. Tres amostras de CTs predominantemente positivos (> 6) e tres amostras com expressao predominantemente negativa (0 ou 1) para os 13 CTs analisados foram submetidas aos microarrays de oligonucleotideos. Essa ferramenta identificou 147 genes como diferencialmente expressos nos dois grupos. A validacao dos genes candidatos da via de adesao focal por RQ-PCR mostrou que o gene ITGA5 foi hipoexpresso quando comparamos o grupo > 6 CTs versus grupo . 6 CTs (p= 0.0030). Quando a comparacao foi feita em plasmocitos tumorais versus plasmocitos normais, o gene ITGA5 manteve a hipo-expressao (p=0,0182) e o gene RhoD mosrou-se hiper-expresso (p= 0,0339). Conclusoes: Baseado em nossos achados, CT7, MAGEA3/6 e LAGE-1 parecem bons cadidatos a imunoterapia, visto que juntos foram expressos em 85% dos casos de MM. 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A validacao por RQ-PCR mostrou que a via de adesao focal parece estar afetada no MM, pois ITGA5 e RhoD foram encontrados diferencialmente expressos, o que sugere um desequilibrio nas moleculas que controlam a homeostasia dessa via.TEDEBV UNIFESP: Teses e dissertações157 p.porUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)CT antigensExpressão gênicaImunoterapiaPrognósticoMieloma MúltiploAnálise do perfil de expressão gênica pela técnica de microarrays de oligonucleotídeos em subgrupos de pacientes com mieloma múltiplo definidos a partir de antígenos câncer/testículoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)Medicina (Hematologia) - EPMORIGINALPublico-10961a.pdfapplication/pdf1769703${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/1/Publico-10961a.pdf6692abd4b0c4fbc52c40895c47b7f571MD51open accessPublico-10961b.pdfapplication/pdf1903968${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/2/Publico-10961b.pdf7d6d0bbc9ac13fe7809cc3fb7f6fea20MD52open accessPublico-10961c.pdfapplication/pdf1805319${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/3/Publico-10961c.pdf413abe08b8997a93962dfa14b8342b3cMD53open accessTEXTPublico-10961a.pdf.txtPublico-10961a.pdf.txtExtracted texttext/plain158775${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/79/Publico-10961a.pdf.txtf04ec3733e03637281355b94c43219f6MD579open accessPublico-10961b.pdf.txtPublico-10961b.pdf.txtExtracted texttext/plain93435${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/82/Publico-10961b.pdf.txte0f3fc20091defad5c0ff12aedfa2862MD582open accessPublico-10961c.pdf.txtPublico-10961c.pdf.txtExtracted texttext/plain14818${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/85/Publico-10961c.pdf.txt4f50773a0a1b2e6203276159766a66d1MD585open accessTHUMBNAILPublico-10961a.pdf.jpgPublico-10961a.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg4195${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/81/Publico-10961a.pdf.jpge87a3a50a660c9f914d047b7aa9f17b4MD581open accessPublico-10961b.pdf.jpgPublico-10961b.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg5491${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/84/Publico-10961b.pdf.jpg74b3548d975c8061a1936d5bc383b5b0MD584open accessPublico-10961c.pdf.jpgPublico-10961c.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg6459${dspace.ui.url}/bitstream/11600/8926/87/Publico-10961c.pdf.jpge3c51a5bdb99994c7650b5dba9aa4036MD587open access11600/89262023-06-03 01:37:13.524open accessoai:repositorio.unifesp.br:11600/8926Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestopendoar:34652023-06-03T04:37:13Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
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Introducao: Antigenos cancer/testiculo (CT) tem se tornado o grupo de antigenos mais estudados no campo da imunoterapia contra o cancer. Objetivos: Este estudo avaliou a expressao global de 14 CTs em MM para identificar possiveis marcadores prognosticos e alvos terapeuticos. Materiais e metodos: A expressao de MAGEA1, MAGEA2, MAGEA3/6, MAGEA4, MAGEA10, MAGEA12, CT7, BAGE-1, GAGE (familia), NY-ESO-1, LAGE-1, SPA17, PRAME e SSX1 foi estudada pela RT-PCR em: 15 tecidos normais, um pool de 10 amostras de medula ossea (MO), tres amostras de plasmocitos obtidos de tonsilas palatinas normais, seis aspirados de MO de doadores, tres aspirados de MO de gamopatias monoclonais de significado indeterminado (GMSI), cinco aspirados de MO de plasmocitomas solitarios, 39 amostras de MO de MM (95% em estadio avancado) e em uma linhagem celular de MM (U266). A plataforma CodeLink Human UniSet I Bioarrays 10,000 genes foi utilizada para as analises de microarrays de oligonucleotideos. Os dados normalizados dos microarrays foram submetidos ao programa Pathway-Express, que identificou cinco genes da via de adesao focal (Crk, Src, ITGA5, RhoA e RhoD) para a validacao pela RQ-PCR. Resultados: A expressao do gene SPA17 foi positiva em todos os tecidos normais e por isso esse gene foi excluido de futuras analises. A expressao do CT7 foi positiva em amostras de MO de um caso de GMSI e um caso de plasmocitoma solitario. A linhagem celular U266 foi positiva para todos os CTs exceto SSX1. A frequencia dos CTs em amostras de MO total de pacientes com MM foi: CT7 = 30/39 (77%); LAGE-1 = 19/39 (49%); MAGEA3/6 = 16/39 (41%); MAGEA2 = 14/39 (36%); GAGE family = 13/39 (33%); NY-ESO-1 = 13/39 (33%); BAGE-1 = 12/39 (28%); MAGEA1 = 10/39 (26%); PRAME = 9/39 (23%); SSX-1 = 10/39 (26%); MAGEA12 = 8/39 (20.5%); MAGEA4 e MAGEA10 = 0%. O modelo de regressao de Cox mostrou que a positividade da familia GAGE e o numero de CTs > 6 sao fatores prognosticos desfavoraveis independentes para a sobrevida global (SG), quando todos os pacientes foram analisados. No entanto, a expressao de CT7 foi o unico fator prognostico desfavoravel para a SG quando apenas os pacientes nao transplantados foram analisados. Tres amostras de CTs predominantemente positivos (> 6) e tres amostras com expressao predominantemente negativa (0 ou 1) para os 13 CTs analisados foram submetidas aos microarrays de oligonucleotideos. Essa ferramenta identificou 147 genes como diferencialmente expressos nos dois grupos. A validacao dos genes candidatos da via de adesao focal por RQ-PCR mostrou que o gene ITGA5 foi hipoexpresso quando comparamos o grupo > 6 CTs versus grupo . 6 CTs (p= 0.0030). Quando a comparacao foi feita em plasmocitos tumorais versus plasmocitos normais, o gene ITGA5 manteve a hipo-expressao (p=0,0182) e o gene RhoD mosrou-se hiper-expresso (p= 0,0339). Conclusoes: Baseado em nossos achados, CT7, MAGEA3/6 e LAGE-1 parecem bons cadidatos a imunoterapia, visto que juntos foram expressos em 85% dos casos de MM. A expressao da familia GAGE, o numero de CTs > 6 e a expressao do CT7 parecem ter impacto desfavoravel na sobrevida global do MM. As analises com os microarrays sugeriram que ha dois grupos de pacientes com MM separados pela expressao dos CTs: grupo dos predominantemente positivos e predominantemente negativos. A validacao por RQ-PCR mostrou que a via de adesao focal parece estar afetada no MM, pois ITGA5 e RhoD foram encontrados diferencialmente expressos, o que sugere um desequilibrio nas moleculas que controlam a homeostasia dessa via. |
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