Avaliação da imunogenicidade de vacinas de DNA e de proteínas recombinantes do envelope dos vírus chikungunya e zika

• Autor(a) principal: Amaral, Marcelo Pires [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6705139; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52957
• topic: Vacinas de DNA e de proteínas recombinantes; Vírus chikungunya e zika; Resposta imune humoral; Resposta imune celular; Adjuvantes; DNA and recombinant protein vaccines; Chikungunya and zika viruses; Humoral immune response; Cellular immune response; Adjuvants

O número de infecções causadas pelos vírus Chikungunya (CHIKV) e Zika (ZIKV) têm aumentado rapidamente em todo o mundo nas últimas décadas. Até o momento, não existe vacina ou tratamento específico contra ambos os vírus. As proteínas do envelope virais desempenham um importante papel na infecção na célula hospedeira e são os principais alvos de anticorpos neutralizantes. No presente trabalho, desenhamos e otimizamos genes sintéticos que codificam as proteínas E2CHIKV e EZIKV, que foram subclonados no vetor pVAX1 para obtenção das vacinas de DNA (pVAX-E2CHIKV e pVAX-EZIKV) e purificadas utilizando “kit” comercial Endofree Plasmid Giga (Qiagen). As proteínas recombinantes E2CHIKV e EZIKV foram produzidas em corpúsculos de inclusão em bactérias BL21(DE3) e BL21(DE3)RIL (respectivamente), sendo posteriormente purificadas por cromatografia de afinidade. As estratégias de imunização foram realizadas no protocolo de indução e reforço homólogo/heterólogo, 15 dias de intervalo entre as doses, com 100 μg (em volume final de 100 μL) das vacinas de DNA (i.m.) pVAX-E2CHIKV ou pVAX-EZIKV ou com 10 μg (em volume final de 200 μL) das proteínas recombinantes (s.c.) E2CHIKV ou EZIKV na presença de diferentes adjuvantes (50 μg poly IC, 20 μg imiquimod ou 10 μg CpG) administradas em camundongos fêmeas, 6-8 semanas, das linhagens C57BL/6 para as vacinas contra CHIKV e BALB/c para as vacinas contra ZIKV. O soro dos animais foi coletado 14 dias após cada dose de imunização para avaliação da resposta imune humoral específica, e 15 dias após a última dose de imunização os camundongos foram submetidos à eutanásia para coleta do baço e linfonodos poplíteos e inguinais para avaliação da resposta imune celular específica. Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes da Comissão de Ética no Uso de Animais da UNIFESP e aprovado sob o protocolo 5759150416. Entre os adjuvantes avaliados, o poly IC se mostrou o melhor candidato para acompanhar as vacinas de proteínas recombinantes E2CHIKV ou EZIKV, induzindo maior magnitude de resposta humoral e celular específicas. Camundongos C57BL/6 imunizados no protocolo homólogo com a vacina de DNA pVAX-E2CHIKV não foi capaz de induzir resposta humoral específica, diferentemente das imunizações homóloga de proteína recombinante (E2CHIKV + poly IC) e heteróloga (pVAX-E2CHIKV / E2CHIKV) que induziram altos títulos de anticorpos específicos. A análise da resposta celular mostrou que 2 doses da vacina homóloga de DNA pVAX-E2CHIKV foi capaz de induzir somente células produtoras de interferon γ (IFN-γ). A vacina homóloga E2CHIKV + poly IC foi capaz de induzir maior magnitude de resposta de células produtoras de IFN-γ e IgG anti-E2CHIKV, e também maior frequência de células B do centro germinativo (CG) e de células T auxiliares foliculares (TFH). Estas respostas celulares também foram observadas nos camundongos imunizados com a vacina heteróloga (pVAXE2CHIKV / E2CHIKV), porém em menor magnitude. Camundongos BALB/c imunizados com as vacinas homólogas de DNA pVAX-EZIKV e de proteína recombinante EZIKV + poly IC tiveram a menor e maior magnitude de resposta humoral específica, respectivamente. Ambas as vacinas heterólogas (pVAX-EZIKV / EZIKV + poly IC, e vice-versa) tiveram magnitude mediana de resposta humoral específica. Contudo, todos os grupos de imunização apresentarem resposta celular após as diferentes estratégias de imunização, a vacina homóloga EZIKV + poly IC foi capaz de induzir maior magnitude de células produtoras de IFN-γ e IgG anti-EZIKV, maior frequência de células B do CG e de células TFH, proliferação e produção das citocinas intracelulares TNF-α e IFN-γ por linfócitos T (LT) CD4+. No geral, as vacinas homólogas de proteína recombinante E2CHIKV ou EZIKV na presença do adjuvante poly IC foram capazes de induzir maior magnitude de resposta humoral e celular, entretanto uma estratégia de vacina heteróloga pode ser uma alternativa para induzir maior qualidade e abrangência da resposta imune contra patógenos intracelulares.