Avaliação da atividade da nifuroxazida sobre via JAK/STAT em linhagens de câncer de tireoide através da deleção do gene STAT3 por CRISPR/CAS9

• Autor(a) principal: Takei, Juliana Ogoshi [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/70508
• topic: Stat3; Câncer de tireoide; Nifuroxazida; Morte celular; Edição de genoma

O câncer é uma das maiores causas de morte no mundo, totalizando aproximadamente 10 milhões de mortes no ano de 2020 e com previsão de aumento para os próximos anos. O câncer de tireoide está entre os tipos mais comuns, atingindo muito mais mulheres do que homens. Entre seus subtipos, o câncer anaplásico de tireoide (ATC) é o menos comum, porém é o mais agressivo e com maior taxa de mortalidade. Atualmente o tratamento para ATC é feito através da tireoidectomia seguida de radioterapia e, em muitos casos, quimioterapia, uso de drogas multikinases, terapia alvo e imunoterapia. No entanto a sobrevida dos pacientes é limitada, variando entre 5 a 12 meses. Devido a alta instabilidade genômica das células do câncer, na maioria dos casos essas terapias perdem a eficácia, sendo necessária a busca por outras opções de tratamento. A nifuroxazida (NFZ) é um antibiótico já utilizado comercialmente em alguns países para o tratamento de colite e diarreia, mas estudos recentes demonstraram que essa droga é uma potencial alternativa de tratamento para alguns tipos de tumor, como por exemplo câncer de mama e colorretal. A NFZ atua através da via JAK/STAT, inibindo a fosforilação de seu componente STAT3, cuja ativação constitutiva já foi relacionada ao surgimento e manutenção de alguns tumores. Em estudo prévio do nosso grupo verificamos que a NFZ diminui viabilidade celular e induziu morte por apoptose. Este projeto teve como objetivo investigar se a NFZ atua através do STAT3 na linhagem celular de ATC HTH83 através da introdução de uma deleção no gene STAT3 por CRISPR/CAS9. Para tanto, foi realizada a edição gênica utilizando um plasmídeo contendo a sequência guia para STAT3 e o gene de CAS9. Após transfeccão e seleção com puromicina, o sucesso da deleção foi confirmado por amplificação e sequenciamento do DNA das células editadas. Foram escolhidos dois clones que apresentaram STAT3 com deleção de 17 (A6) e 12 (B5) pares de bases. Foi confirmada a inibição da expressão de STAT3 em A6 por Western Blot, enquanto B5 mostrou uma expressão bem baixa. Por fim, foi avaliada a viabilidade através de ensaios de MTT que sugeriram que a NFZ não diminui a viabilidade celular de A6, mas que teve algum efeito no clone B5. Por último, foi iniciada a avaliação da capacidade de formação de colônias das células editadas e selvagens tratadas com NFZ. Dessa maneira sos resultados sugerem que a NFZ perdeu atividade na linhagem com STAT3 deletado, indicando que atuaria através da via JAK/STAT na linhagem de ATC HTH83.