Solubilização de membranas modelo de diferentes composições pelo detergente triton X-100

• Autor(a) principal: Mattei, Bruno [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4997602; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50525
• topic: Calorimetria; Detergentes; Membranas; Triton X-100; Colesterol; Microscopia; Óptica; Detergents; Membranes; Triton X-100; Cholesterol; Calorimetry; Microscopy; Optics

Detergentes são moléculas anfifílicas amplamente utilizadas como agentes solubilizantes membranas biológicas. No entanto, membranas biológicas tratadas com detergentes ac-ese fragmentos insolúveis ricos em esfingolipídios e colesterol. Devido a semelhanças de ,.....r.n,.posíção e característica, esses fragmentos têm sido associados aos lipid rafts e à fase líquidoa a. Aqui foi realizado o estudo de aspectos físico-químicos que regem o processo de UUilllLClçãOde modelos miméticos da membrana: vesículas lipídicas de composição controlada puros ou misturas, principalmente dos lipídios POPC, SM e colesterol). Diferentes écnicas foram utilizadas para estudar o processo de solubilização de vesículas lipídicas pelo detergente TX-100, um dos detergentes mais empregados em protocolos de solubilização de membranas biológicas. O fenômeno geral e o tamanho das estruturas formadas durante a solubilização foi obtido por turbidez, espalhamento de luz estático e/ou dinâmico; os aspectos termodinâmicos da interação detergente-lipídio foram investigados por calorimetria de titulação isotérmica e a possível interferência do detergente na transição de fase dos lipídios foi investigada por calorimetrta diferencial de varredura; a capacidade dos detergentes de permeabilizar a membrana foi investigada por cinética de vazamento de uma sonda fluorescente e microscopia confocal; o processo de solubilização de vesículas gigantes foi avaliado por microscopia óptica de contraste de fase e fluorescência. No trabalho foram investigadas diferentes composições lipídicas (fosfolipídios puros, misturas lipídicas binárias e misturas lipídicas ternárias) a fim de obter informações sobre os fatores que influenciam a obtenção de fragmentos insolúveis de membrana. Por meio dos experimentos realizados foi possível concluir que membranas celostoüpldíos puros (POPC e SM), atingindo a fase líquido-desordenada e gel são totalmente solúveis à ação do detergente, enquanto que a adição de colesterol, induzindo um maior grau de ordenamento dos lipídios leva a condições nas quais as membranas são parcial ou totalmente insolúveis; o fator de insolubilidade está condicionado à concentração de colesterol em vesículas com misturas binárias de lipídios, atingindo a total insolubilidade em situações nas quais a membrana tende ou atinge a fase líquido-ordenada; isto também se reflete na constante de afinidade do detergente por essas membranas. Além disso, vesículas na fase gel são solubilizadas com menores concentrações de TX-100 do que vesículas na fase líquido-desordenada, possivelmente em decorrência na menor capacidade da membrana de acomodar os detergentes; somado a isso, a adição do detergente também parece induzir uma transição de fases em vesículas na fase gel e uma coexistência de fases fluidas em vesículas de POPC:colesterol. Em misturas ternárias de lipídios, as situações nas quais é possível observar uma maior resistência à solubilização é observada em regiões com maior fração de SM e cotesterol. Por fim, as membranas tomam-se permeáveis em razões molares TX-100/lipídio inferiores ao processo de solubilização, mostrando que mesmo antes de atingir a fase de coexistência bicarnada-rnicela o detergente já