Estudo das enzimas envolvidas na biossíntese do heparam sulfato e ácido hialurônico em células endoteliais resistentes ao anoikis após silenciamento gênico do sindecam-4

• Autor(a) principal: Miranda, Suzany dos Santos [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/11600/69128
• topic: Anoikis; Heparam Sulfato; Ácido hialurônico; Sindecam-4; Biossíntese de heparam sulfato

Anoikis é um tipo de morte celular programada desencadeada pela perda de adesão da célula a matriz extracelular ou perda da interação entre as células. A regulação da resistência ao anoikis envolve mecanismos complexos, mas um enfoque promissor tem sido nas enzimas associadas à biossíntese do heparam sulfato (HS) e do ácido hialurônico (AH). Este estudo analisou as enzimas envolvidas na biossíntese de HS e AH, em células endoteliais de aorta de coelho resistentes ao anoikis com o gene sindecam-4 silenciado (miR-Syn-4-1-Adh1-EC e miR-Syn-4-2-Adh1-EC), por PCR em tempo real, imunodetecção e imunofluorescência. Nossos resultados indicam diminuição na expressão das enzimas Glucuronil C5-Epimerase (GLCE), Heparam Sulfato 2-Sulfotransferase (HS2ST) e Heparam Sulfato 6-Sulfotransferase (HS6ST), Heparam Sulfato 3-Sulfotransferase (HS3ST) e Heparam Sulfato 3-Sulfotransferase 3A1 (HS3ST3A1) após o silenciamento gênico do sindecam-4. Por outro lado, identificamos um aumento na expressão da enzima N-Deacetilase/N-Sulfotransferase (NDST). Em relação as enzimas envolvidas na biossíntese de AH, os dados indicam um aumento na expressão de Ácido Hialurônico Sintase 1 (HAS1) e Ácido Hialurônico Sintase 3 (HAS3), enquanto houve uma redução na expressão da enzima Ácido Hialurônico Sintase 2 (HAS2). Além disso, investigamos a síntese de AH pelo método fluorimétrico elisa-like, onde é possível observar um aumento na síntese de ácido hialurônico nas linhagens silenciadas para o gene do sindecam-4. Esses resultados sugerem o envolvimento das enzimas da biossíntese do HS e AH na transformação celular e aquisição da resistência ao anoikis.